亚硫酸 5-6% SO₂，适用于分析, 优级品，阿拉丁

盘点 PCR 的七大应用领域

为尿嘧啶。设计两个引物对（甲基化和未甲基化），从而根据重亚硫酸盐处理 DNA 的扩增结果来区分目标位点的甲基化状态[7,8]。 甲基化研究中所使用的 DNA 聚合酶除了能够扩增富含AT的序列，还必须能够读取识别重亚硫酸盐处理后 DNA 中的 U 残基。而高保真 DNA 聚合酶含有来自于古细菌起源的尿嘧啶结合域，所以不适用于 MSP（除非经过特殊修饰）。 实时 PCR 可代替终点 PCR，为 MSP 提供更准确的甲基化定量分析。利用实时 PCR，对 PCR 扩增子的熔解曲线分析是检测目标位点甲基化状态

DNA甲基化研究方法的回顾与评价（上）

的甲基化检测，特异位点甲基化的检测和新甲基化位点的寻找。根据研究所用处理方法不同可以分为：基于PCR的甲基化分析方法；基于限制性内切酶的甲基化分析方法；基于重亚硫酸盐的甲基化分析方法和柱层法等。Christina Dahl和Per Guldberg[3]归纳总结了主要的甲基化分析方法及相关特性，在此基础上我们略加以补充。 2 甲基化研究方法学回顾 2.1 基因组整体水平甲基化分析 2.1.1 高效液相色谱柱（HPLC）及相关方法 HPLC是一种比较传统的方法，能够定量测定基因组整体水平DNA

LightCycler通过实时荧光PCR技术进行DNA甲基化分析

验设计复杂，易产生假阴性或假阳性等问题，提示科学家寻找更加容易且准确的分析手段。 甲基化敏感性高分辨熔解分析（MS-HRM）是近年兴起的一种适用于评估特定基因DNA甲基化的新技术[4]。它基于当前实时荧光PCR仪器的前沿应用 – 高分辨率熔解曲线分析（HRM），使用既可扩增甲基化序列也可扩增非甲基化序列的引物对来自经重亚硫酸盐修饰的DNA的相关区进行PCR扩增。重亚硫酸盐修饰DNA，让非甲基化的胞嘧啶转换为尿嘧啶，而5－甲基胞嘧啶保持不变，随后通过PCR扩增检测感兴趣区域的甲基化状态。在MS-HRM中