NADA-green,荧光D-氨基酸，2253733-11-

常用蛋白标签、序列及特性

；可增强大肠杆菌中的表达水平。硫氧还蛋白尽管其尺寸很小（11kDa），但硫氧还蛋白作为促溶标签非常有效（与所有增溶标签一样，溶解度不一定意味着功能性折叠，并且融合蛋白可能在其标签被切割时发生沉淀）。硫氧还蛋白有个独特的性质，就是耐高温，在高达 80°C 的温度下稳定，并且可以赋予其融合伴侣一定的热稳定性。这样，细胞蛋白可以经热变性处理而不影响融合蛋白。纯化可以使用苯基胂氧化物树脂或抗体共轭树脂来实现。V5来源于副粘病毒 SV5 的 P / V 蛋白的 95 - 108 位氨基酸

qPCR常见问题及其分析

PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束

实时定量PCR的原理、探测化学物质及探针优化(二)

SYBRR Green PCR试剂盒得出相当好的结果。重复试验的结果非常接近，NTC根本没有出现扩增。这个试剂盒对于利用SG扩增低拷贝数的模板非常有用。3.2 双标记探针 双标记探针的优化比SG优化容易。最重要的事情，也就是需要优化的是引物/探针浓度和它们的比例。最适的MgCl2浓度通常是4-5mM （终浓度），然而商业上可买到的Master Mixes用到7.5mM （终浓度）。 荧光探针的设计直接关系到实时监测的成败。下面的规则总结了设计引物和双标记探针应该考虑的一些建议。 a） 针对双