Cy7 琥珀酰亚胺酯，1432019-64-1，≥96%，阿

小鼠腹水及单细胞悬液制备及注意事项

抗[E-AB-F0997A]进行封闭：往 100 μL（细胞数1×106）细胞悬液中加入 1 μg 纯抗，室温封闭 15 min，直接加入流式抗体进行后续实验。 巨噬细胞检测应尽量避免使用含花青素的流式抗体（如 PE-Cy7），会增加非特异性染色。若为非巨噬细胞检测，使用含花青素的流式抗体（如 PE-Cy7）时也需要封闭。

多色流式实验荧光染料的选择

光染料在同一激光激发的染料中选择时，优先选择亮度高的染料，以保证最佳分辨率。常用的高亮度染料有PE、PE/Cy5、PE/Cy7、APC、PerCP/Cy5.5、AlexaFlour 647等，但是并不是说染料亮度高，在您的流式细胞仪上就能获得较好的信号，这还需要您的仪器的配备合适的激光、滤光片和探测器。 2) 平衡抗原表达水平和染料荧光亮度 在单色流式检测实验中，我们通常会选择亮度最强的几种染料，如PE、APC等等。但是，在多色流式检测时，有时因为颜色的限制不得不用到一些亮度

10分钟梳理流式染色中固定的常见问题！

式染色带来的影响我们才能更好的做好流式实验。固定对荧光染料的影响是什么？主要表现在固定剂对串联染料（tandem-dye，如 APC/Cy7、PE/Cy7 等）的影响：一个是固定剂有可能造成串联染料的断裂，比如 APC-Cy7 和 4%PFA 接触时间超过 4 个小时染料就有可能断裂，所以如果细胞直接重悬在固定液里面建议尽快上机，如果要放到第二天上机，需离心去除固定液后重悬在流式染色液或者是 PBS 里面，当然有一些新的串联荧光素可以有效减少这种情况，比如 BioLegend 的 APC/Fire750TM