AF 488 NHS Ester，1374019-99-4，

流式课堂 | 细胞带有 GFP 荧光时，如何进行流式凋亡分析？

随着生物研究进入基因时代，转染技术的应用越来越广泛。在此过程中，通常会引入 GFP（绿色荧光蛋白）标签，去验证转染是否成功。 在之前的流式课堂中，我们曾多次提到过流式配色问题。今天，就来带大家看看，带有 GFP 标签的细胞，在流式凋亡检测中，应该如何配色和分析结果。 一、如何选择试剂盒 挑选试剂盒时，需要选择干扰少的荧光组合。GFP 的激发/发射波长为 488/510，通常在流式细胞仪中的检测通道为 FL1。因此，我们不能选择荧光标签为FL1检测通道的凋亡检测试剂盒，如 AF488

【共享】常用抗体标记荧光染料的选择

偶联物，最大限度的提高了信噪比。图2. CF染料的超强特异性；由于AF染料制备过程中含有大量带负电的磺化基团，容易非特异性结合正电基团，请看AF790 Dye与CF790的条带特异性对比。3. 优异的标记效率生物偶联后的活性染料一般很容易水解，会在运输，操作及储存中带来诸多不便，最终致染料结合效率低下。像Alexa Fluor® dyes,DyLight? dyes and IRDyes®等严重的磺化作用有较强的吸湿性，恶化水解作用等问题。例如： AlexaFluor® 488 在应用时琥珀酰亚胺脂酯

做了这么多的 WB，你知道化学发光和荧光可以一起检测吗？

了 BMMSCs 中确实发生了硫巯基化。 为了定量描述硫巯基化程度，作者还同时使用化学发光法进行了 western blot，检测出靶蛋白的总量作为 Input，对数据进行归一化（normalization）处理，结果如下： 图 2. 用马来酰亚胺分析 BMMSCs 中 TRPV3 和 TRPM4 钙通道的巯基化作用。NaHS- 和 DTT 处理的 BMMSCs 中，TRPV3 蛋白的绿色荧光降低。 实验原理巧妙，但操作步骤只需要在传统的 IP-WB 基础上稍作调整： 1. 荧光标记：AF488-C5