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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温;常规运输
- 英文名:
2-(Methylsulfonyl)pyrimidine-5-carbonitrile
- 库存:
期货
- 供应商:
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- CAS号:
38275-50-2
- 规格:
M193111-250mg/M193111-50mg
| 规格: | M193111-250mg | 产品价格: | ¥658.90 |
|---|---|---|---|
| 规格: | M193111-50mg | 产品价格: | ¥144.90 |
中文名:2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈
英文名:2-(Methylsulfonyl)pyrimidine-5-carbonitrile
纯度:≥95%
货号:M193111
Cas号:38275-50-2
存储温度:室温
运输条件:常规运输
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文献和实验培养 24 - 48 h,细胞汇合度达到 80% - 95% 左右时收取上清,该上清液即可用于提取外泌体。 使用外泌体专用无血清培养基: 待细胞汇合度~50%时,移去原有完全培养基,添加新培养基进行培养,新培养基由 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基组成; 待细胞生长汇合度约为70-80%时,移去培养基; 使用1×PBS溶液将细胞润洗2-3次; 加入外泌体专用无血清培养基继续培养24 - 48 h,待细胞汇合度到 80% - 95% 时收取细胞培养上清液,该上清液即可用于外泌
转化成尿嘧啶且DNA模板破坏加剧,而时间过短会导致修饰不彻底; (3)反应温度应控制在50~55℃(若用国产恒温水浴箱建议温度设定在53℃为好); (4)DNA模板量应控制在 只要遵循以上几点基本上能保证99%未甲基化的胞嘧啶转化尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变。但是,此修饰过程中模板DNA有约96%已经降解。当DNA样品较少时(如石蜡包埋组织、血清DNA),在纯化回收时可加人适量鲑鱼精DNA或糖原(约1g)作为载体,有利于DNA沉淀(加入载体后轻轻晃动Ependof管可见絮状DNA
)和兔补体(通常1:17-1:20终浓度)。37℃水浴培养1h,每20min振荡一次。 5. 用RPMI-1640洗涤骨髓细胞2次,室温,280g离心10min。计数活细胞。用RPMI-5完全培养基调整细胞浓度至1×106 个细胞/ml。 6. 加入小鼠重组GM-CSF至终浓度为700-1000U/ml或者20ng/ml。将细胞悬液一般每只小鼠可以得到4×107 -5×107 个骨髓细胞(没有去除淋巴细胞)按1ml/孔接种24孔板。 7. 每2天洗涤
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