2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈，38275-50-2，≥9

细胞上清液提取常见问题解析

培养 24 - 48 h，细胞汇合度达到 80% - 95% 左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。 使用外泌体专用无血清培养基： 待细胞汇合度~50%时，移去原有完全培养基，添加新培养基进行培养，新培养基由 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基组成； 待细胞生长汇合度约为70-80%时，移去培养基； 使用1×PBS溶液将细胞润洗2-3次； 加入外泌体专用无血清培养基继续培养24 - 48 h，待细胞汇合度到 80% - 95% 时收取细胞培养上清液，该上清液即可用于外泌

甲基化MSP特异性PCR全程易出现的常见问题与相关控制措施

转化成尿嘧啶且DNA模板破坏加剧，而时间过短会导致修饰不彻底； (3)反应温度应控制在50～55℃(若用国产恒温水浴箱建议温度设定在53℃为好)； (4)DNA模板量应控制在 只要遵循以上几点基本上能保证99％未甲基化的胞嘧啶转化尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变。但是，此修饰过程中模板DNA有约96％已经降解。当DNA样品较少时(如石蜡包埋组织、血清DNA)，在纯化回收时可加人适量鲑鱼精DNA或糖原(约1g)作为载体，有利于DNA沉淀(加入载体后轻轻晃动Ependof管可见絮状DNA

树突细胞的分离-用小鼠骨髓前体细胞培养树突细胞

）和兔补体（通常1：17-1：20终浓度）。37℃水浴培养1h，每20min振荡一次。 5. 用RPMI-1640洗涤骨髓细胞2次，室温，280g离心10min。计数活细胞。用RPMI-5完全培养基调整细胞浓度至1×106 个细胞/ml。 6. 加入小鼠重组GM-CSF至终浓度为700-1000U/ml或者20ng/ml。将细胞悬液一般每只小鼠可以得到4×107 -5×107 个骨髓细胞（没有去除淋巴细胞）按1ml/孔接种24孔板。 7. 每2天洗涤