异硫氰酸丙酯，628-30-8，≥98%(GC)，阿拉丁

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略

其与30S核糖体亚单位的结合，从而抑制翻译[97]。已经设计了几种不同的策略以使mRNA形成二级结构的可能性最小。提高RBS中A、T残基的丰度能增强某些基因的表达[98]。同样地，突变SD区上游或下游的某些特定核苷酸就会抑制mRNA二级结构的形成和提高翻译效率[99]。另一途径得益于在E.coli中自然发生的一种翻译偶联现象[100]。翻译偶联的机制已被用来解释来自多顺反子mRNA的不同基因的并列表达。已经证明，当galK与上游基因偶联翻译时，经修饰的gal强启动子能够指导半乳糖激酶的高水平合成

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翻译效率。另外，基因5’编码区中GC含量似乎也影响其表达。这在人胸苷酸激酶(TS)中已经得到证明[179]。在不改变所编码蛋白的前提下，将TS cDNA的第三、四、五密码子的嘌呤碱基变成胸腺嘧啶，使得TS基因的表达占到E.coli中总蛋白量的25-30%。综上所述，有许多可变因素可能影响实验结果，如位置效应、稀有密码子的群集和mRNA的二级结构等等。 六、蛋白质的蛋白酶解 蛋白酶解是一个选择性的、高度调节的过程，该过程参与许多代谢活动。E.coli在细胞

关于论坛中所有Native PAGE/非变性电泳及蛋白回收的经典总结

化钠、甘油和硫还原试剂如DTT的存在也将对酶的活性恢复有利；6）疏水蛋白质恢复活性时，必须用无离子去污剂或两性离子去污剂替代SDS，以保持蛋白质的可溶性。其他实验室经验1，在凝胶中复性是可以做到的。用2.5％triton x-100 洗脱45分钟X2，即可将SDS洗脱出来。可以试一试。先回收再复性的方法不太清楚。2，有的蛋白可以复性，方法是用将胶在2.5％triton x-100 沁泡1小时，37度摇荡。然后在缓冲液中泡1小时，37度摇荡，再上样前不能加热。不过，只有很少一些蛋白可以复兴，最好的办法环视