1,6-二(丙烯酰氧基)-2,2,3,3,4,4,5,5-八

实时定量PCR的原理、探测化学物质及探针优化(二)

机型/多通道机型：发射：：470nm检测：510nm多通道机型：发射：470nm检测：585nm6）SG的稳定性如何？只要不进行稀释，SG是非常稳定的。一旦稀释，可以保存1周到3个月，这取决于冻融次数，推荐配置成一定浓度的贮存液，用时现用现配稀释液。7）随着mRNA和随后得到的cDNA和DNA的数量和质量的提高，检测到低拷贝数的能力会增强。用到的引物浓度通常是50nM到300nM。8）利用SG作溶解曲线分析的结果会因以下的因素而有所差别：a）产物的大小 b）产物的GC含量。由于以上的因素单核

常用的分子生物学基本技术（二）

  PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时，突变检出率可达70％-95％，片段大于400bp时

qPCR 实验中遇到这 3 个问题怎么办？

- 120%，且标准曲线 R2≥ 0.99，引物的扩增效率才是合格的，定量出来的 CT值才可以用来计算。且扩增效率越接近 100%，引物的扩增性能越优。 1、若扩增效率不满足 90 - 120%，那 CT值偏大是因为扩增效率不达标导致的，需要重新设计引物。 2、若引物的扩增效率满足 90 - 120% 前提下，CT 值仍然很大，则是基因本身表达量低造成的 CT 值偏大，可以提高模板的添加量，但最根本的方法是改为探针法进行定量。探针法的灵敏度是高于染料法的。