Cy7.5 马来酰亚胺，阿拉丁

小鼠腹水及单细胞悬液制备及注意事项

抗[E-AB-F0997A]进行封闭：往 100 μL（细胞数1×106）细胞悬液中加入 1 μg 纯抗，室温封闭 15 min，直接加入流式抗体进行后续实验。 巨噬细胞检测应尽量避免使用含花青素的流式抗体（如 PE-Cy7），会增加非特异性染色。若为非巨噬细胞检测，使用含花青素的流式抗体（如 PE-Cy7）时也需要封闭。

做了这么多的 WB，你知道化学发光和荧光可以一起检测吗？

，一组使用 NaHS 处理，一组则不作处理；然后用荧光马来酰亚胺染料 Alexa Fluor 488 C5 maleimide（下文简称MAL，Invitrogen，A10254）标记半胱氨酸上的硫醇基团，使正常的半胱氨酸通过 -S- 与 MAL 连接，而硫巯基化的半胱氨酸通过二硫键 -S-S- 与 MAL 连接，如下图： 图 1. 文献 Fig. 6G，硫巯基化分析步骤 接下来加入 DTT，硫巯基化蛋白上特有的二硫键就会被解开，导致荧光 MAL 分子脱落，荧光信号减弱。所以，荧光信号发生变化就验证

多色流式实验荧光染料的选择

光染料在同一激光激发的染料中选择时，优先选择亮度高的染料，以保证最佳分辨率。常用的高亮度染料有PE、PE/Cy5、PE/Cy7、APC、PerCP/Cy5.5、AlexaFlour 647等，但是并不是说染料亮度高，在您的流式细胞仪上就能获得较好的信号，这还需要您的仪器的配备合适的激光、滤光片和探测器。 2) 平衡抗原表达水平和染料荧光亮度 在单色流式检测实验中，我们通常会选择亮度最强的几种染料，如PE、APC等等。但是，在多色流式检测时，有时因为颜色的限制不得不用到一些亮度