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文献和实验抗体二抗上连接有荧光染料。直接标记染色背景低,实验程序少尽量减少实验工序和过程,以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内,建议尽量用直接标记的抗体进行实验。 3、流式抗体荧光标记的选择: 如果实验中检测单一指标:不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以某仪器为例:PE >APC >PE-Cy5 >PerCP >FITC >PerCP-Cy5.5,通常来说,PE最强,适用于弱表达抗原。FITC强度较弱,适用于强表达抗原,使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。 如果同时检测多个
方法有很多,不同的使用方法过程中,因为对蛋白样品的处理方式不一样,蛋白的含量有差异,对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测,目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等,如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的,可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息,选择尽可能有效果的抗体。同样,申请到免费的抗体样品是个很好的途径。 (4)标记物的特异性 一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗
有些可怕?!使用这些「脱靶」抗体,如果您的检测结果为阴性,那就极有可能错失您苦苦寻觅的信号;如果您的检测结果为阳性,那么您的实验结论则完全不成立,需要推倒重来!!!这要是到了最后投文章的时候才意识到可能的隐患,那情况就相当尴尬了。目前,纵观市场上商业化抗体厂商,能够提供特异性证明的屈指可数。我们常见的 WB 验证、IHC 验证、流式验证事实上仅为应用有效性验证,并不能排除抗体的非特异性结合。简单的说,此验证非编辑所要的「验证」!那么到底什么样的验证才是抗体特异性最有效证明呢?根据 Nature
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