Recombinant Human IRAK4 protein

Recombinant Human IRAK4 protei

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  • ¥1290 - 3960
  • 帛科
  • BK-DB4109
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  • 2025年07月07日
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    • 英文名

      Recombinant Human IRAK4 protein

    • 保质期

      12个月

    • 供应商

      上海帛科

    • 保存条件

      -20 to -80 °C

    • 规格

      50μg、100ug 、1mg

    重组蛋白质的可溶性鉴定:
    1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中,然后在-80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
    2. 冰中解冻。
    3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次, 每次 10 sec,间歇 10 sec,电压 200-300 V。
    4. 10000g,4oC,离心 20min,取上清(为溶液 A), - 20 oC 保存; 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解(为溶液 B),同样 -20 oC 保存,供后继分析使用。
    5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳, 考马斯亮蓝染色, 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中, 则为可溶性蛋白;如果是在 B 溶液中,则为非可溶蛋白。

    Recombinant Human IRAK4 protei
    商品介绍:
    货号 BK-DB4109 用途 仅供科研研究实验
    纯度 >90% as determined by SDS-PAGE 预测分子量 23.63 kDa
    表达宿主 E.coli 种属 Homo sapiens (Human)
    内毒素: Please contact with the lab for this information.
    蛋白构建: A DNA sequence encoding the human IRAK4 (Met1-Val200) was fused with His tag
    制剂: Supplied as solution form  in  PBS pH 7.5 or lyophilized  from PBS pH 7.5.
    运输方式: In general, proteins are provided as lyophilized powder/frozen liquid. They are shipped out with dry ice/blue ice unless customers require otherwise.
    稳定性&储存: Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze thaw cycles.Store at 2 to 8 °C for one week .Store at -20 to -80 °C for twelve months from the date of receipt.
    复溶: Reconstitute in sterile water for a stock solution.A copy of datasheet will be provided with the products, please refer to it for details.
    分子别名: Interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK-4,Renal carcinoma antigen NY-REN-64.
    背景介绍: Interleukin-1 receptor-associated kinase 4, also known as Renal carcinoma antigen NY-REN-64, IRAK-4 and IRAK4, is a member of the protein kinase superfamily, TKL Ser/Thr protein kinase family and Pelle subfamily. IRAK4 contains onedeath domain and oneprotein kinase domain. IRAK4 is required for the efficient recruitment of IRAK1 to the IL-1 receptor complex following IL-1 engagement, triggering intracellular signaling cascades leading to transcriptional up-regulation and mRNA stabilization. It also phosphorylates IRAK1. A member of the IL-1 receptor (IL-1R)-associated kinase (IRAK) family, IRAK4, has been shown to play an essential role in Toll-like receptor (TLR)-mediated signaling. IL-1-mediated IRAK4 kinase activity in T cells is essential for induction of IL-23R expression, Th17 differentiation, and autoimmune disease. Pharmacological blocking of IRAK4 kinase activity will retain some levels of host defence, while reducing the levels and duration of inflammatory responses, which should provide beneficial therapies for sepsis and chronic inflammatory diseases. Defects in IRAK4 are the cause of recurrent isolated invasive pneumococcal disease type 1 (IPD1) which is defined as two episodes of IPD occurring at least 1 month apart, whether caused by the same or different serotypes or strains. Recurrent IPD occurs in at least 2% of patients in most series, making IPD the most important known risk factor for susequent IPD. Defects in IRAK4 are also the cause of IRAK4 deficiency which causes extracellular pyogenic bacterial and fungal infections in otherwise healthy children.
    重组蛋白质的分离纯化:
    1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2(Lysis buffer under denaturing conditions )中,室温下搅拌和吹打沉淀,避免泡沫生成。
    2. 10000g ,4 oC,离心 30 min,收集上清液。
    3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子,并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统,用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose,调节 A280 值至零线。
    4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中, 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
    5. 分别用 5 ~ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2(Washbuffer 1 and 2)清洗柱 子,直至 A280 值低于 0.01。
    6. 用洗脱液(Elution buffer)洗脱重组蛋白质, 在 A280 值监测下,收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。

    Recombinant Human IRAK4 protei
    表达载体在基因工程有以下几种元件:
    (1)选择标志的编码序列;
    (2)可控转录的启动子;
    (3)转录调控序列(转录终止子,核糖体结合位点);
    (4)一个多限制酶切位点接头;
    (5)宿主体内自主复制的序列。

    重组蛋白质的诱导表达:
    1. 挑取转化有质粒的单菌落, 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养过夜。
    2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml(1:20)选择性 LB 液体培养基 中, 37 oC,250 rpm/min 振摇培养至光密度(OD600=0.6)时,取 1 ml 样本作 为诱导前标本, 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀,-20 oC 冻存备用。
    3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中,使 IPTG 终浓度为 1 mM ,37 oC ,250 rpm/min 振摇培养 4 ~ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本,同上法收集菌体沉淀, -20 oC 冻存备用。
    4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS(pH= 8.0)重悬, 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液, 煮沸加热 5min,SDS 聚凝胶(SDS-PAGE)电泳分离 , 考马斯亮蓝染色 3 小时后,脱色观察结果。
    5. 选取诱导成功的细菌克隆,扩大诱导规模,收集菌体沉淀,于- 20 oC 保存,准备做下一步分析及纯化。

    Recombinant Human IRAK4 protei
    公司出售的相关产品:
    Recombnant Human CD5, C-H Recombinant Chinese cobra Cytotoxin 1 protein, His
    兜甲蛋白封闭多肽 Phosphoserine, BSA Conjugated
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    ATP酶钙离子转运蛋白PMCA3封闭多肽 DBT Antibody Blocking Peptide
    溶酶体累积病相关蛋白/口吃相关蛋白封闭多肽 SKIV2L2 Antibody Blocking Peptide
    细胞表面趋化因子受体5封闭多肽 NISCH Antibody Blocking Peptide
    神经元突触膜胞外分泌调节蛋白4封闭多肽 CACNA1S Antibody Blocking Peptide
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    电压依赖性钙通道Cav1.1封闭多肽 CES3 Antibody Blocking Peptide
    重组眼镜蛇蛇毒蛋白 LOR/Loricrin Antibody Blocking Peptide

     

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