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文献和实验滤纸上,吸去过多的水分。将膜的光滑面向下搭在电泳槽 两侧的滤纸桥上,注意搭平。 2.加样 用微量加样器于负极端1.5cm处加样1µl~3µl,注意样品要成一条直线且垂直方向。也可用血球计数板盖玻片蘸取样品轻轻点上。 3.电泳 电压10V/cm~15V/cm或0.4mA/cm~0.6mA/cm电泳45min~60min,至电泳区带展开约2.5cm~3.5cm时,关闭电源。 4.染色 将膜浸于氨基黑染色液中,染色数分钟。 5.透明 将染色的醋酸纤维膜浸于透明液中,漂洗5min ~10
浸于巴比妥缓冲液中,浸透后用竹镊子夹到滤纸上,吸去过多的水分。将膜的光滑面向下搭在电泳槽两侧的滤纸桥上,注意搭平。 2.加样 用微量加样器于负极端1.5cm处加样1µl~3µl,注意样品要成一条直线且垂直方向。也可用血球计数板盖玻片蘸取样品轻轻点上。 3.电泳 电压10V/cm~15V/cm或0.4mA/cm~0.6mA/cm电泳45min~60min,至电泳区带展开约2.5cm~3.5cm时,关闭电源。 4.染色 将膜浸于氨基黑染色液中,染色数分钟。 5.透明 将染色的醋酸纤维膜
钟。 5.透明 将染色的醋酸纤维膜浸于透明液中,漂洗5min ~10min,至背景呈乳白色为止。为了防止膜上出现许多气泡,可以逐渐升高透明液浓度10%、20%以至30%。 6.结果观察及保存 透明后,将膜贴于玻璃上,干后取下,即可观察结果并保存。 7.定量 将各区带剪下,分别浸于4Mol/L NaOH 4ml中,振摇数次,约2h,色泽被浸出,于580nm~620nm比色,测出各区带的OD值。同时剪一块大小相似无蛋白的透明膜同样处理,做为对照。 计算各区带蛋白
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