雄甾酮(ADT)多克隆抗体(辣根过氧化物酶标记)

蛋白质印迹分析(Western Blot Analysis)

缓冲溶液中，转移时间可从45分钟延长到过夜进行。 由于湿法的使用弹性更大并且没有明显浪费更多的时间和原料，因此我们在这里只描述湿法的基本操作过程。 对于目的蛋白的识别需要采用能够识别一抗的第二抗体。该抗体往往是购买的成品，已经被结合或标记了特定的试剂，如辣根过氧化物酶。这种标记是利用辣根过氧化物酶所催化的一个比色反应，该反应的产物有特定的颜色且固定在固相载体上，容易鉴别。因此可通过对二抗的识别而识别一抗，进而判断出目标蛋白所在的位置。其他的识别系统包括碱性磷酸酶系统和 125

免疫印迹（Western Blotting）实验

）、蛋白质属性（分子量大小）选择适当的封闭物及缓冲液（PBS 或 TBS）。 五、杂交 封闭后，目标蛋白便与特异性的一抗进行免疫反应，一抗可以是标记的，也可以是非标记的。标记的一抗与免疫原结合后，可直接进行检测（直接法），降低了背景和非特异性结合，但信号较弱。非标记的一抗配合标记的二抗使用（间接法），对信号有级联放大作用，可以增加灵敏性和信噪比。二抗既可标记放射性同位素，也可标记染料或其他分子，或与酶偶联。常用的酶包括碱性磷酸酶（AP）和辣根过氧化物酶（HRP），通过与底物反应产生

基于蛋白质原料的体外诊断产品的稳定性问题

对照。然后将这些平板干燥并密封保存在放有干燥剂的铝箔袋中。室温保存一段时间后，单克隆抗体包被的平板被用来进行夹心法酶联免疫测定，而多克隆抗体包被的平板则进行以辣根过氧化物酶为抗原的直接吸附测定。图1 单克隆抗体在室温下稳定性的研究在室温下保存18月后，除了以BSA作为稳定剂的单克隆抗体外，所有单克隆抗体样本的活性回收率都在比较好的范围70-80%（见图1）；而多克隆抗体的实验结果则表现出更显著的差异（见图2）。但是，关系到稳定剂Superblock的50%活性的损失，似乎发生在干燥的过程中，而在其后的保存过程中