P450-Glo™ CYP3A4 Screening Sys

说明

P450-GloTM 筛选系统(P450-GloTM Screening Systems) 提供了使用发光方法进行细胞色素P450 (CYP450) 酶活检测所需的所有试剂。该系统包括：含有重组人CYP450 酶的膜制备物、细胞色素P450 所对应的发光前体底物、NADPH 再生系统、反应缓冲液、萤光素检测试剂、以及无萤光素的水。膜制备物是从感染了杆状病毒的昆虫细胞制备而来，含有人CYP450 和P450 还原酶(CYP2C9 和CYP3A4 中还带有细胞色素b5)。P450-GloTM 筛选系统还包含灭活细胞色素P450 活性的膜制备物，作为阴性对照。这些检测试剂盒特别适合于检测药物和新化合物对细胞色素P450 酶类活性的影响。

细胞色素P450 反应是通过将CYP450 发光前体底物与CYP450 酶和NADPH 再生系统共同孵育而进行。P450-GloTM Substrates(P450-GloTM 发光前体底物) 是萤火虫萤光素酶底物甲虫萤光素((4S)-4,5-dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylicacid 或D-luciferin) 的衍生物。P450-GloTM Substrates 不与萤光素酶发生反应，然而，当P450 酶类将其转换成萤光素时，即可与萤光素酶作用而发光。发光的强度与P450 酶的活性直接呈正比。使用光信号来检测CYP450 的活性，因为由细胞色素P450 产生的D-luciferin 的量与光的亮度直接成正比。

新的P450-GloTM CYP3A4 Screening System with Luciferin-IPA 包含我们最新的3A4 底物，该底物是现有的P450-GloTM 3A4底物中最灵敏的底物。在所有的P450-GloTM CYP3A4 底物中，Luciferin-IPA 表现出最宽泛的抑制谱。

DMSO (Dimethyl sulfoxide， 二甲亚砜) 即使在很低的浓度(<0.1%) 下，仍然可以抑制细胞色素P450 中3A4 异构体的活性。P450-GloTM CYP3A4 System (Luciferin-PPXE) DMSO-Tolerant Assay 是专为在3A4 反应中耐受DMSO 而设计。与不含DMSO 的对照相比，该检测法在0.2% 的DMSO 存在时，信号: 背景比很少改变或不改变。

在细胞色素P450 反应之后，再加入Luciferin DetectionReagent ( 萤光素检测试剂)。该试剂在终止细胞色素P450 反应的同时，也产生了稳定的辉光型发光信号。辉光型反应产生稳定的信号，从而无需严格控制发光信号检测的时间。本产品的操作手册是为多孔板模式而制作的，但也很容易应用到单管模式中。

特点

• 试剂盒配置完备：该系统包括含有重组人细胞色素P450 酶的膜制备物、适合细胞色素P450 的发光前体底物、NADPH 再生系统、反应缓冲液、萤光素检测试剂、以及无萤光素的水。

• 快速：发光检测的模式使得无需进行耗时的分析，如HPLC 等。

• 结果可靠：无论是96 孔板还是384 孔板模式下，Z` 值均大于0.8；结果可靠。

• 输出信号为发光信号：避免了荧光化合物的干扰。

• 动态范围宽广，背景低：极其灵敏。

• 假阳性率极低：使用专利稳定的萤火虫萤光素酶和专利的萤光素酶检测配方，使得在进行细胞色素P450 抑制剂筛选时，由分析物所引起的萤光素酶抑制所导致的假阳性率极低。

• 可扩展：可以轻松地升级至384 孔板检测模式。

• 可进行自动化检测：自动化方法已经经过确证，详情请查看
www.promega.com/automethods/。