- ￥4500
- 雅吉生物
- 上海
- YS1529C
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
ATCC
- 库存：
100
- 细胞类型：
ATCC
- 品系：
ATCC
- 组织来源：
ATCC
- 相关疾病：
ATCC
- 物种来源：
ATCC
- 免疫类型：
ATCC
- 细胞形态：
ATCC
- 是否是肿瘤细胞：
ATCC
- 器官来源：
ATCC
- 运输方式：
顺丰快递
- 年限：
ATCC
- 生长状态：
ATCC
- 规格：
T25瓶
人稳定表达RspoI蛋白的293T细胞HARSpondin1FcHEK293Tcells收到后处理
培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将瓶盖拧松）
细胞培养步骤
a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
b、细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；
3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。
C、细胞复苏：
1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
人稳定表达RspoI蛋白的293T细胞HARSpondin1FcHEK293Tcells售后条款：
1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；
5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；
6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。
2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
1. 客户造成细胞污染，不重发；
2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；
6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；
7. 视具体情况而定。
欢迎新老客户咨询订购：人稳定表达RspoI蛋白的293T细胞HARSpondin1FcHEK293Tcells
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- 内容
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文献和实验，利用药物 aphidicolin 诱导 293T 为非增殖细胞。实验结果如下： Day3 Day8 Day14 数据显示，IDLV 感染非增殖细胞 14 天依然维持稳定表达能力；而感染增殖细胞时，随着细胞的复制以及传代，8-14 日病毒颗粒已丢失殆尽。 2. 非整合特性验证 分别采用 LV、IDLV 感染 293T 细胞，观察感染后 3、6、8 天的病毒基因组相对含量数值的变化（QPCR 检测病毒基因组与内参 actin 的相对值）： QPCR 检测病毒基因组数据 数据表明，在增殖的 293T 细胞
immunodeficiency virus) 、 SIV (Simian immunodeficiency virus) 。其中研究最多最为透彻的是HIV。 重组 慢病毒的产生：瞬时转染法，即将包装结构和载体结构瞬时共转染法如293T 高表达细胞系而产生重组慢病毒。此法非常成功，大多实验室采用此法。包膜质粒、包装质粒与载体质粒共转(多用磷酸钙共沉淀法)染293T细胞直接产生生产细胞。最后重组慢病毒分泌到培养基中进行培养而得到大量载体慢病毒。 三质粒来包装产生重组 慢病
基因； 2.根据客户要求选择对应载体； 3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体； 4. 测序鉴定重组质粒，高纯化（不含内毒素）提取的重组质粒； 5. 使用高纯提重组载体和慢病毒包装质粒共转染 293FT 细胞，进行病毒包装并收集上清液； 6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒； 7. 使用病毒液感染 293T 细胞，药物筛选细胞，构建稳定表达细胞系。
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