Millipore：SX0002500，Swinnex 换膜

原核表达的心得

蛋白表达，但是IPTG的浓度对蛋白表达也没上面影响。 什么原因，什么原因呢，隐约记得上次蛋白量比较多好像是160rpm摇的，马上换转数，SDS-PAGE图如下： 蛋白大小又回到原来大小了，原来转数真的影响表达啊，没有加IPTG的菌体自身蛋白比较多，说明IPTG对菌体还是有影响的，IPTG的浓度真的没有多大关系，这次0.2mM的也诱导出来了。 蛋白怎么表达这么少呢，是不是诱导时间太少，我又做了6h诱导时间，结果目的蛋白没有多大变化，反而菌体蛋白增加了。那低温诱导过夜呢，试试看，我做

一篇搞定 IP、co-IP 实验

某个实验间隙… 萌新：开题报告已提交，转眼 1 个月过去了，实验还是一头雾水，为啥我的 co-IP 拉不下来蛋白？ 奋斗中的师兄：我当初正好相反，拉下来的蛋白被抗体条带覆盖住了，换个抗体忒不好找，无奈换了个蛋白，还好挺顺利。 大师兄：蛋白吧，不但种类多，理化性质差异较大，关键它们又喜欢组队在细胞里干活，IP、co-IP 又是常用的手段，掌握好这个工具还是很重要的，总不能随随便便就换个蛋白。 那要怎么快速掌握这项实验，轻松搞定各种疑难杂症呢？ 我们依据三十多年的 IP/co-IP 实验经验，总结

聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点（图）

形式的电泳的优点是节省两性电解质试剂、加样数量多、利于比较不同样品的电泳结果，而且电泳后的固定、染色和干燥都很方便、迅速。水平板式等电聚焦电泳的最大优点是防止了由于电极液的电渗作用而引起pH梯度的漂变。 三、器材及试剂： 1．器材： 稳流稳压电源，水冷式平板等电聚焦电泳电槽，玻璃板（11.5×11.5×0.2cm），大铁文具夹，塑料模具（厚0.5mm，中间开孔9.0×9.0cm），小眼科剪子，镊子，解剖刀，1ml注射器，50μl和100μl微量注射器，擦镜纸，滤纸，精密pH试纸，凝血板