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文献和实验如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
荧光定量PCR(Real-time PCR)是目前基因表达定量分析的重要检测手段,已经为越来越多的研究者所采用。“好的开始是成功的一半”,Perrez-Novo等(Perrez-Novo et al., 2005)曾报道获得高质量RNA对后续PCR定量结果的准确性是非常重要的,而高质量RNA是获得高质量cDNA的必要条件,所以本文着重介绍一下如何获得高质量cDNA。 高质量cDNA应具备以下几个特点:无基因组DNA残留、能准确反应出样本真实的转录情况和信息完整且浓度适当等特点。
生物技术的发展日新月异,随着 PCR 技术在医学(疾病检测)、农业(转基因检测)以及其他各个方面的应用,高通量的样本核酸提取已经迫在眉睫,很多厂商推出了全自动核酸提取仪,其中各种原理的都有:有的中看不中用的,有的不仅贵还不好用的;乱花渐欲迷人眼,选择一款核酸自动提取仪时,免不了要细细分析,不然花了冤枉钱,还整了一堆摆设回来。 市面上这些多如牛毛的全自动核酸提取仪,大多采用两种原理:离心柱法和磁珠法。 离心柱法全自动核酸提取仪采用离心机和自动移液装置
的浓度。 4.抽提的质粒 DNA 电泳时怎么出现切口、断裂或降解现象? (1)使用的是收集后冷冻保藏的细菌。解决方法:使用新鲜培养的细菌。 (2)宿主菌富含核酸内切酶。解决方法:增加一步 Rinse A 洗涤步骤以彻底去除残留的核酸内切酶。或者将质粒 DNA 进行乙醇沉淀。 (3)质粒 DNA 在 Solution II 中暴露过久,易造成质粒 DNA 的切口断裂。裂解步骤控制在 5 分钟内完成。 (4)培养的细菌被杂菌污染。解决方法:重新挑取单菌落培养细菌。 5.抽提的质粒 DNA 电泳时怎么出现基因
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