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文献和实验RNA purification --- hot phenol
Hot phenol may also be used to remove DNA. 1. Add equal volume of TE-saturated phenol to RNA solution. Mix. 2. Heat to 70 ℃ for 5 minutes. 3. Centrifuge at top speed for 10 minutes at room
TROUBLESHOOTING No products are visible in any lane. 1. Potential Problem: PCR amplification is not initiated. Recommendations: a. Confirm that all PCR components were added to the reaction tube. b. If performing hot start PCR
(MMLV)反转录酶或选择嗜热DNA聚合酶可能在高温h (60 度 -70度 )有效地逆转录mRNA,从而消除了5‘端由于高CC含量导致的mRNA 二级结构对逆转录的影响;改进之四是采用热启动PCR (hot start PCR)技术和降落PCR(touch down PCR)提高PCR反应的特异性。随着RACE技术日益完善,目前己有商业化RACE技术产品推出,如CLONTECH的MarathoTM技术和SMART TM RACE技术术。邢桂春等(2001)先后使用上述两种试剂盒进行RACE反应
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