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文献和实验在评估中,故结果仅作为参考和内部品管之一部份。 材料与设备: ATCC mycoplasma detection kit:可作50~100 reactions. 提供1st stage primer mixture与2nd stage primer mixture positive control DNA (A. laidlawii ; M. pirum) PCR reagents : Taq polymerase ( 5 U / ul ) dNTP( dGTP, dCTP, dTTP
,荧光的强度与原5mC的水平成正比。这种方法可以直接测定基因组整体5mC水平。其优点是所用试剂价格低廉且稳定性好,避免了放射性污染,但缺点是费时费力,而且氯乙醛是一种有毒的物质。 2.2 特异性位点的DNA甲基化的检测 2.2.1 甲基化敏感性限制性内切酶(methylation-sensitive restriction Endonuclease,MS-RE)-PCR/Southern法 这种方法利用甲基化敏感性限制性内切酶对甲基化区的不切割的特性,将DNA消化为不同大小的片段后再进行分析
乙醛共同孵育,这样5m C就转变为带有强荧光的乙烯胞嘧啶,荧光的强度与原5m C的水平成正比。这种方法可以直接测定整体5m C水平。其优点是所用试剂价格低廉且稳定性好,避免了放射性污染,但缺点是费时费力,而且氯乙醛是一种有毒的物质。 2.2 特异性位点的DNA 甲基化的检测 2.2.1 甲基化敏感性限制性内切酶(methylation-sensitive restriction Endonuclease,MS-RE)-PCR/Southern法 这种方法利用甲基化敏感性限制性内切酶对甲基化区
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