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脊髓星形胶质细胞机械性损伤的体外培养模型

1.材料与方法 取新生的wistar 大鼠脊髓,剪碎,0125 %胰蛋白酶消化1h ,用含血清的DMEM培养液终止胰蛋白酶的作用; 而后吹打成散在的单个细胞,进行细胞计数,按5 ×105 个Pcm2 密度进行接种。培养至第10天时加10mM Leu2methy12ester 除杀小胶质细胞。于16d 时,用塑料吸管头划刮培养皿,产生三条宽约1mm长约1. 5cm 的损伤带,对照组未划伤,每组共分为7 个时间点,分别是划伤后0h、2h、6h、12h、24h、48h、72h

用RNaseIII制备siRNA库来诱发RNAi

ester (PMA) 提前24小时诱导处理使c-FOS 表达水平升高。用由RNase III 消化c-FOS 双链RNA 得到的siRNA s 混合物转染293细胞，用同样方法检测对基因表达的抑制效果。结果显示用RNase III 消化各种双链RNA 得到的siRNA 库对相应的基因表达抑制效果分别是：GAPDH 表达水平下调78% ，La 表达水平下调86% ，而c-FOS 表达水平则下调75% 。这个结果表明RNase III 得到的siRNA s 库能够非常有效的抑制基因的表达。Figure

用RNase III制备siRNA库来诱发RNAi

采用50nM 佛波脂 phorbol ester (PMA) 提前24小时诱导处理使c-FOS 表达水平升高。用由RNase III 消化c-FOS 双链RNA 得到的siRNA s 混合物转染293细胞，用同样方法检测对基因表达的抑制效果。结果显示用RNase III 消化各种双链RNA 得到的siRNA 库对相应的基因表达抑制效果分别是：GAPDH 表达水平下调78% ，La 表达水平下调86% ，而c-FOS 表达水平则下调75% 。这个结果表明RNase III 得到的siRNA s 库