牛Apelin 17蛋白(AP17) ELISA 试剂盒

牛Apelin 17蛋白(AP17) ELISA 试剂盒  

产品包装：盒装
性状：瓶装液体
规格：96T/48T
保存条件：2-8℃
保存期限：6个月
运输条件：2-8℃低温运输，干冰低温运输。
 
保存条件及保存期：
1.试剂盒保存：2-8℃。
2．保存期：6个月

试剂盒组成：

1. 酶标板：用于包被抗原和加入酶标抗体；

2. 酶标抗体：与待测血清中的样本结合；

3. 抗原：用于包被酶标板，与待测血清中的样本结合；

4. 阴性对照血清：用于设置阴性和阳性对照；

5. 阳性对照血清：用于设置阴性和阳性对照；

6. 洗涤液：用于清洗酶标板；

7. 底物：用于显色反应；

8. 终止液：用于终止显色反应。

操作步骤
  实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为确认实验结果准确性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了确认实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。


试剂盒会出现的问题及解决办法：

1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶标记物。
解决办法：请按照操作步骤进行。

b.原因：试剂盒内容物未能充分回。
解决办法：确定试剂盒内容物回温后再进行操作。

c.原因：室温太低。
解决办法：若室温太低(<19℃)，请于操作步骤4，适当延长温育时间。

d.原因：未使用试剂盒的清洗液清洗。
解决办法： 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因：试剂盒已过保存期限。
解决办法：请更换成仍在保存期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳，或是平行性不好。

a.原因：温育位置避光不好或受到气流干扰。
解决办法： 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.原因：操作时间拖太久。
解决办法：请在方法熟练后再进行操作。

c.原因：微孔间相互污染。
解决办法： 加样品时，请小心勿溅出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：标准品或酶标记物所加入的量不一致。
解决办法：请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。

e.原因：添加样品或试剂的操作方法不正确。
解决办法：加样品或试剂时，吸头请勿接触微孔。

f.原因：洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。
解决办法：请随时监控洗板机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。
a.原因：室温太高(>25℃)。
解决办法： 若无法降低室内温度，请适当缩短步骤4的温育时间。

b.原因：底物溶液受到污染。
解决办法： 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用。

c.原因：反应时间超过太久。
解决办法：请控制反应时间。

d.原因：酶标记物污染了盒内其它试剂。
解决办法：使用过的吸头应立即丢弃，可避免试剂间相互污染，凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡，再以清水冲洗干净，可确保无残留)

牛Apelin 17蛋白(AP17) ELISA 试剂盒  

ELISA的样本实验准备
在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的可在-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
液体类标本:  包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1. 血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2. 血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3. 尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4. 细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

5. 培养细胞
    检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6. 组织标本
    切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。  
 



实验注意事项
1. 抗原和抗体的储存：应严格按照说明书要求存放抗原和抗体，避免反复冻融和长时间暴露在高温环境中。同时要确认试剂盒未过期，以获得可靠的实验结果。
2. 加样技术：加样时应确认加入的体积准确且不产生气泡，避免加在孔壁的边缘，以免影响与固相表面的接触。加样时应在每孔的旁边放置一个加样对照孔，以监测加样的准确性和重复性。
3. 温育：温育是ELISA实验中的重要步骤，温育时间和温度的控制对于抗原抗体反应的进行和结果的影响至关重要。必须严格按照说明书要求进行温育，并注意保持恒温状态。
4. 洗涤：洗涤是ELISA实验中不可缺少的一步，它可以去除未结合的物质，提高检测的特异性和灵敏度。洗涤时应确认每次洗涤时间充足，并更换洗涤液以确认洗涤效果。同时要避免在洗涤过程中产生气泡，以免影响洗涤效果。
 
结果判断:
1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。
2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 

 
 试剂盒 必知说明：

1）只有全部使用本试剂盒配套试剂才能确保检测效果，

2）不能混用其他制造商的产品，只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到好的检测结果。

3）由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

4）实验结果与试剂盒的效果、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关。

5）请务必准备充足的标本备份。

6）不同批次的同一产品可能会有少许差别，

如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作。

 化学实验室守则：

1. 实验室要保持安静，严禁大声喧哗、吵闹。

2. 在实验前，要预先作好实验前前准备，进入实验室时，要有秩序，按规定的座位就座。

3. 实验前，必须了解清楚实验内容、目的、要求和实验步骤。

4. 实验开始时，应先查点仪器、产品是否齐全，不得随意调换，如发现问题，及时报告。

5. 实验必须按步骤进行，并仔细观察，做好记录，实验后后及时写好实验报告。

6. 实验时，要爱护仪器，节省产品，由于违反操作规程而损坏丢失的仪器，必须赔偿。

7. 实验结束，要将仪器整理或清洗，保持桌面，室内的整洁后才能离开。

8. 本守则在实验前都应需知。

 
 笃玛代测服务：
技术服务内容：
1、双抗体夹心法检测抗原
2、间接法检测抗体
3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。

寄标本时需注明以下情况
1、标本编号；
2、所测项目；
3、是否做复孔；
4、实验后标本是否寄回。

问：代测，有什么具体要求？
样本要处理过的，寄来的样本附检验要求  （一定要附检验要求 ）
样本寄来要记得保存好，一定要放置冷冻冰袋

问:什么样的检验要求？要出示什么吗？
怎样算是处理过？还是就只是离心保存？
答：离心保存，检验要求，就是标本标号，和特殊要求

问：测好多指标 血清不分开可以么？
答：要分开，分好后，分别标上序列号，便于实验好区分。

 
 
 
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