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- 2025年07月12日
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MedChemExpress LLC
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产品分类
CRISPR/Cas9
MCE 国际站：CRISPR/Cas9
品牌：MedChemExpress (MCE)
概述：源自细菌适应性免疫系统的CRISPR/Cas9系统是最强大的基因组编辑技术之一。它是一种RNA引导的基因组编辑工具，由Cas9核酸酶和单向导RNA（sgRNA）组成。通过与 DNA 靶序列进行碱基配对，sgRNA 使 Cas9 能够识别并切割特定的靶 DNA 序列，产生双链断裂 (DSB)，从而触发 DSB 位点或附近的细胞修复机制和突变。 CRISPR/Cas9技术已被广泛研究，其应用已从细胞内的基因修饰扩展到生物体。 CRISPR/Cas9在基因治疗中的潜在作用使其成为癌症治疗中最热门的热点之一。 CRISPR/Cas9介导的癌症治疗的不同概念，包括肿瘤相关基因操控、肿瘤免疫治疗、肿瘤研究模型和克服抗癌耐药性，在不同的癌症类型中都被建立起来。 CRISPR-Cas9系统的最大优点是其简单性和广泛适用性，适用于迄今为止测试的几乎所有生物系统的基因组操作，包括细胞系、干细胞、酵母、蠕虫、昆虫、啮齿动物和哺乳动物。对于可靶向的DNA位点，只需要相应的20个核苷酸的gRNA即可引导CRISPR-Cas9在所需位置切割靶DNA。断裂 DNA 末端的修复可以通过 NHEJ 生成插入缺失（已用于生成随机基因组突变），也可以在存在供体寡核苷酸或包含 DSB 位点侧翼同源序列的 DNA 片段的情况下通过 HDR 进行，以生成精确的定点核苷酸或大的基因替换，导致目标基因突变或校正的产生。
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文献和实验CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理
选育新方法。而 CRISPR-Cas9 技术的出现，更是极大推动了微生物基因组编辑准确性和效率的提高。【背景】泓迅科技利用 CRISPR-Cas9 技术编辑酵母菌中的一个 920bp 的 ADE1 基因。ADE1 是腺嘌呤合成相关基因，如果 ADE1 失活，则细胞将会积累红色色素，呈现红色菌落。【方法】1、质粒构建2、sgRNA 活性检测3、挑选活性较高的 sgRNA 进行基因组定点编辑4、利用基因功能变化、表性变化和测序等方法检测基因定点修饰结果。【结论】1、从颜色表型变化得知，酵母菌落变成红色菌落，可知 ADE
以最火热的 p53 为例Step1 先找 p53 基因序列1. NCBI--输入 p53 并选择物种 human：tumor protein p53 [Homo sapiens (human)]https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene2. Ctrl+F，输入 sequence，快速定位（当然其实拉下去就是了），点击 Genebank3. 下载 p53 基因序列4. 用 SnapGene 软件打开序列，并简单了解每个元件最好是可以学一下 SnapGene 这个软件的使用
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