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流式JC-1检测
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伊莱博生物科技(上海)有限公司
细胞实验技术服务
JC-1线粒体膜电位荧光探针染色步骤(流式细胞仪法):
1. 于6-,12或24-孔板上进行细胞铺板,密度为5×105 cells/mL。37℃,5% CO2培养箱培养过夜。选择合适的化合物根据特定的步骤进行凋亡诱导。 注:进行凋亡诱导时的细胞密度建议不超过1×106 cells/mL,也可根据自己的细胞类型培养至合适的密度。2. 取0.5 mL细胞悬液至无菌的离心管内;3. 室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清。4. 用0.5 mL JC-1工作液重悬细胞,于37℃,5%CO2培养箱孵育15-30 min;注意:一般情况,15 min足以进行充分的染色。5. 室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清;6. 用2 mL细胞培养液或者缓冲液重悬细胞,之后室温条件400 x g离心5 min;吸掉上清;7. 重复步骤6);8. 用0.5 mL新鲜培养液或者缓冲液重悬细胞,即可进行后续的流式分析。注意:请马上进行流式定量分析,此细节很重要。数据分析:含有红色JC-1聚集物的健康细胞线粒体用FL2通道检测;含有绿色JC-1单体的凋亡或不健康细胞用FL1(FITC)通道检测。
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