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HTRF的能量供体是铕(Eu)和铽(Tb)的穴状化合物。在穴状化合物内,Eu和Tb被永久地嵌合在结构非常稳定的笼状结构内。该结构由J.M.Lehn's教授发明,并在1987年获得了诺贝尔化学奖。穴状结构可以耐受反应体系中的金属离子、EDTA、DMSO、PH的影响。实验整个操作过程无需避光,荧光基团不会发生光淬灭,可以连续多次激发读值。
HTRF的能量受体有两种,XL665和d2。它们的光学性质相同,分子量不同。前者是分子量为105KD的别藻蓝蛋白(APC),将APC的亚基偶联在一起后使其不能解离,提高了稳定性。后者分子量为1 KD,在特定实验中有独特优势。XL665和d2的激发波长均为620nm,发射波长为665 nm。
HTRF结合Tag-lite技术可以将供体探针(Tb)和受体探针(XL665或d2)标记在活细胞表面的蛋白受体(如GPCR)上,可以用于检测GPCR与配体的结合情况,或者是进行GPCR同源二聚化实验、GPCR内源化实验。
HTRF试剂盒的产品组合不断增长,助力科学家对热门适应症的研究能力,包括免疫肿瘤学,神经科学和心脏病学等。除现有试剂盒,HTRF可提供标记试剂盒和标记定制服务,用于定制开发新的检测靶点和方法。
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[摘 要]: 荧光共振能量转移( FRET)是用于对生物大分子之间相互作用定性、定量检测的一种有效方法。根据所基于的荧光显微镜配置不同而有不同的应用侧重,可在溶液,细胞悬液,多细胞,单细胞,细胞膜,细胞器等不同层次对生物大分子间的相互作用距离,动力学特性等进行研究。本文就基于常规宽场荧光显微镜、全内反射荧光显微镜,连续激光共聚焦显微镜、脉冲多光子激发显微镜等显微技术的FRET方法分别进行了介绍和对比评估。对于实验室应用和配置FRET系统具有
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