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HTRF TR-FRET技术

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  • HTRF TR-FRET
  • 2026年04月30日
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    均相时间分辨荧光(Homogeneous TRF,HTRF)技术基于时间分辨荧光(TimeResolved Fluorescence,TRF]和荧光共振能量转移(Fluorescence ResonanceEnergy Transfer,FRET)两大技术原理,将荧光检测的灵敏性、均相免洗和低背景等特点结合在一起。HTRF技术已在基础研究,新靶点发现和验证,高通量筛选,候选化合物优化等阶段广泛使用,应用于GPCRs,激酶,细胞因子,磷酸化蛋白,表观遗传,生物大分子(抗体)等检测和定量。

    HTRF的能量供体是铕(Eu)和铽(Tb)的穴状化合物。在穴状化合物内,Eu和Tb被永久地嵌合在结构非常稳定的笼状结构内。该结构由J.M.Lehn's教授发明,并在1987年获得了诺贝尔化学奖。穴状结构可以耐受反应体系中的金属离子、EDTA、DMSO、PH的影响。实验整个操作过程无需避光,荧光基团不会发生光淬灭,可以连续多次激发读值。

    HTRF的能量受体有两种,XL665和d2。它们的光学性质相同,分子量不同。前者是分子量为105KD的别藻蓝蛋白(APC),将APC的亚基偶联在一起后使其不能解离,提高了稳定性。后者分子量为1 KD,在特定实验中有独特优势。XL665和d2的激发波长均为620nm,发射波长为665 nm。

    HTRF结合Tag-lite技术可以将供体探针(Tb)和受体探针(XL665或d2)标记在活细胞表面的蛋白受体(如GPCR)上,可以用于检测GPCR与配体的结合情况,或者是进行GPCR同源二聚化实验、GPCR内源化实验。
    HTRF试剂盒的产品组合不断增长,助力科学家对热门适应症的研究能力,包括免疫肿瘤学,神经科学和心脏病学等。除现有试剂盒,HTRF可提供标记试剂盒和标记定制服务,用于定制开发新的检测靶点和方法。

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