产品简介:
CTAB法是从植物样本中提取DNA的一种经典方法,可以用于多种类型的植物样本。CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7 M NaCl) ,CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入醇(乙醇或异丙醇)沉淀即可使核酸分离出来。
本产品的成分包括CTAB,Tris,EDTA,NaCl等,使用前加入配套的还原剂,提高溶液稳定性。
产品组分:
组分 |
BL1192A |
BL1192B |
CTAB抽提液 |
200ml |
500ml |
还原剂 |
1ml |
1ml |
使用方法(仅供参考):
一 DNA提取
1.取适量的CTAB抽提液,按照抽提液:还原剂=500:1的比例混匀,例如1ml CTAB抽提液中加入2ul 还原剂,混匀后置于65℃预热,建议现配现用。
2.取适量的新鲜植物组织或者叶片,液氮预冷,研磨成吸粉状,装入离心管中。
3.向粉碎后的组织中按照100mg粉末加入0.5ml预热的抽提液,充分混匀,65℃孵育30-60min,期间适量振荡混匀。
4.14000g常温离心5min,转移上清至新的离心管中。
5.在上清中加入1/100体积的RNaseA溶液(10mg/ml)(BL543A),如500μl上清液加入5μl RNaseA溶液,37℃处理20min。
6.加入等体积的Tris饱和酚/氯仿/异戊纯(25:24:1),轻缓颠倒离心管,混匀8-10次,14000g常温离心10min,转移上清至新的离心管中(为提高DNA纯度,该步骤可重复一次)。
7.加入等体积的氯仿/异戊纯(24:1)或者氯仿,颠倒混匀8-10次,14000g常温离心10min,取上层水相,转移至新的离心管中。
8.加入0.6倍体积的异丙醇(可-20℃预冷),轻轻混匀, -20℃静置30min。
9. 14000g 4℃离心10min,小心弃上清,不要影响到管底的核酸沉淀
10.加入1ml 70%乙醇,室温静置10min,14000g 4℃离心3min,小心弃上清,不要影响到管底的核酸沉淀。
11. 14000g 4℃离心1min,用移液器洗尽残余乙醇,超净台吹干核酸沉淀,等乙醇味道散去后加入适量的纯水或者TE缓冲液溶解,低温保存,注意干燥时间不宜过长导致干燥彻底,核酸不易溶解。
二 RNA提取
注:以下操作步骤所有试剂耗材都需要保证为RNase-free
1.取适量的CTAB抽提液,按照1/1000体积加入DEPC,如100ml抽提液加入100ul DEPC,混匀过夜,高温高压,即得到CTAB抽提液(RNase-free),按照CTAB抽提液:还原剂=100:1的比例混匀,例如1ml CTAB抽提液中加入10ul 还原剂,混匀后置于65℃预热,建议现配现用。
2.取适量的新鲜植物组织或者叶片,液氮预冷,研磨成吸粉状,装入离心管中。
3.向粉碎后的组织中按照100mg粉末加入0.5ml预热的抽提液,充分混匀,65℃孵育30-60min,期间适量振荡混匀。
4.14000g常温离心5min,转移上清至新的离心管中。
5.在上清中加入1/100体积的RNaseA溶液(10mg/ml)(BL543A),如500μl上清液加入5μl RNaseA溶液,37℃处理20min。
6.加入等体积的水饱和酚/氯仿/异戊纯(25:24:1),轻缓颠倒离心管,混匀8-10次,14000g常温离心10min,转移上清至新的离心管中。
7.加入等体积的氯仿/异戊纯(24:1)或者氯仿,颠倒混匀8-10次,14000g常温离心10min,取上层水相,转移至新的离心管中。
8.加入0.5倍体积的LiCl(RNase-free),轻轻混匀,-20℃静置30min。
9. 14000g 4℃离心10min,小心弃上清,不要影响到管底的核酸沉淀
10.加入1ml 70%乙醇(RNase-free),吹打漂洗沉淀,14000g 4℃离心3min,小心弃上清,不要影响到管底的核酸沉淀
11.14000g 4℃离心1min,用移液器洗尽残余乙醇,超净台吹干核酸沉淀,加入适量的RNase-free水溶解,-80℃保存,注意干燥时间不宜过长导致干燥彻底,核酸不易溶解。
注意事项:
1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
常温储存,两年有效。