- ￥1600
- Solarbio
- 北京
- BC5950
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Isocitric Acid Content Assay Kit
- 库存：
999
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC5950-50T/48S
- 规格：
50T/48S
异柠檬酸含量检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
货号：BC5950
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
| 提取液一 |
液体60 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 提取液二 |
液体10 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂一 |
液体60 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂二 |
液体750 μL×1支 |
2-8℃保存 |
| 试剂三 |
粉剂×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 粉剂一 |
粉剂×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 标准品 |
粉剂×1支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二工作液：临用前先离心，根据样本量按试剂二：蒸馏水=10μL：90μL（共100μL，约1T）的比例配制后使用，现配现用。
2、 试剂三：临用前加入4 mL蒸馏水充分溶解，未用完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。
3、 标准品：临用前加入1 mL蒸馏水充分溶解成20μmol/mL异柠檬酸标准品。
4、 工作液：临用前根据样本量按试剂一：试剂二工作液：试剂三=750μL：100μL：50μL（共900μL，约1T）配成工作液后使用，现配现用。
产品说明：
异柠檬酸（Isocitric Acid）是柠檬酸的异构体，在许多水果和蔬菜以及由这些原料制成的食品中发现了大量的异柠檬酸盐。生物能够利用的是D型异柠檬酸，是三羧酸循环中的一个成分。异柠檬酸在异柠檬酸脱氢酶（ICDH，EC1.1.1.41）的作用下变成a-酮戊二酸，同时NAD（P）还原为NAD（P）H，据此可以计算异柠檬酸含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL石英比色皿、天平、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体的操作步骤请见“产品资料”文件
注意事项：
1.最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
2.若样本ΔA<0.005，可适当增大样本量后测定；若样本ΔA>1.2或A测定>1.5，可用蒸馏水稀释上清液后测定，
注意同步修改计算公式中的稀释倍数。
3.提取液一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定，如需测定蛋白浓度，需另取组织。
实验实例：
1、 取0.1139g苹果加入提取液进行冰浴匀浆，取上清后按照测定步骤操作，用1mL石英比色皿测得ΔA测定=（A2测定-A1测定）-（A2空白-A1空白）=（0.241-0.125）-（0.066-0.059）=0.109，带入标曲y=0.1414x-0.0466，R2=0.9991，计算x=1.100，按样本质量计算异柠檬酸含量得：
异柠檬酸含量（μmol/g 质量）=1.1875×x÷W×F=11.468 μmol/g 质量。
2、 取0.1033g橙子叶加入提取液进行冰浴匀浆，取上清用蒸馏水稀释2倍后按照测定步骤操作，用1mL石英比色皿测得ΔA测定=（A2测定-A1测定）-（A2空白-A1空白）=（1.001-0.923）-（0.066-0.059）=0.071，带入标曲y=0.1414x-0.0466，R2=0.9991，计算x=0.832，按样本质量计算异柠檬酸含量得：
异柠檬酸含量（μmol/g 质量）=1.1875×x÷W×F=19.129 μmol/g 质量。
3、 取500μL橙汁饮料取上清后按照测定步骤操作，用1mL石英比色皿测得ΔA测定=（A2测定-A1测定）-（A2空白-A1空白）=（0.856-0.840）-（0.066-0.059）=0.009，带入标曲y==0.1414x-0.0466，R2=0.9991，计算x=0.393，按液体体积量计算异柠檬酸含量得：
异柠檬酸含量（μmol/mL）=x×F=0.393 μmol/mL。
参考文献：
[1] Kvasni Ka, Franti Ek, et al. "Determination of Isocitric Acid in Citrus Juice—A Comparison of HPLC, Enzyme Set and Capillary Isotachophoresis Methods." Journal of Food Composition & Analysis 15.6(2002):685-691.
[2] Kong, Min Jung, et al. "Mitochondrial NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase deficiency increases cisplatin-induced oxidative damage in the kidney tubule cells." Cell Death & Disease 9.5(2018):488.
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文献和实验参考文献：
[1] Kvasni Ka, Franti Ek, et al. "Determination of Isocitric Acid in Citrus Juice—A Comparison of HPLC, Enzyme Set and Capillary Isotachophoresis Methods." Journal of Food Composition & Analysis 15.6(2002):685-691.
[2] Kong, Min Jung, et al. "Mitochondrial NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase deficiency increases cisplatin-induced oxidative damage in the kidney tubule cells." Cell Death & Disease 9.5(2018):488.
正规称为乌头酸水合酶。在三羧酸循环中，催化柠檬酸和异柠檬酸之间相互转换的辅酶。 EC4． 2． 1． 3。 的平衡条件下，三种物质的比例是 91∶ 3∶ 6（乌头酸酶平衡）。广泛分布于动植物和微生物中，肝脏、肾脏、肌肉、前列腺中含量特别高。曾经认为它与延胡索酶是同一种酶，还认为上述反应中涉及二种不同的酶，现在已经明确是由单一的酶催化的。酶活性可为反乌头酸、氟化柠檬酸强烈所抑制。此酶的反应机制在于通过价铁 -柠檬酸复合体以高度特异的三点结合
思的是，生命有机分子绝大多数具有手性，且几乎都以单一异构体形式存在。 自然界中氨基酸有 L 和 D 两种对映异构体，除甘氨酸不具有手性外，组成蛋白质的其他氨基酸几乎都为 L 型。D 型氨基酸作为哺乳动物神经和内分泌系统中一类重要的神经和激素调节物质，具有重要的生理功能。不同于 L 型，D 型氨基酸的含量往往较低，其来源除了通过自身的合成外，主要通过食物的摄入和体内肠道菌的合成，特别是部分哺乳动物自身难以合成的重要 D 型氨基酸。同时，宏基因组研究也揭示人类肠菌 D 型氨基酸的生物合成和与 II 型糖
的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
