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D-Xylose Content Assay Kit
999
北京索莱宝科技有限公司
BC4395-100T/96S
100管/96样
D-木糖含量检测试剂盒说明书
微量法
货号:BC4395
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体55 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一A |
粉剂×4瓶 |
常温保存 |
试剂一B |
液体40 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
粉剂×1支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一的配制:临用前取一瓶试剂一A加入10mL试剂一B,溶解后备用,2-8℃保存1周,若试剂变黄色则已经变质,不能继续使用。
2、 标准品:10mg木糖。临用前加入1 mL蒸馏水配制成10mg/mL木糖标准溶液备用,2-8℃保存4周。
产品说明:
木糖是一种戊糖。天然D-木糖是以多糖的形态存在于植物中。木糖可以活化人体肠道内的双岐杆菌并促其生长,双歧杆菌是益菌,该菌越多越有益人体健康,食用木糖能改善人体的微生物环境,提高机体的免疫能力;同时木糖在小肠上段吸收后不参与体内的代谢,经肾脏排出。因此,D-木糖的吸收一直作为小肠吸收不良的重要功能指标。
D-木糖在强酸条件下水解产生糠醛,糠醛可与间苯 三酚反应生成粉红色化合物,在554 nm处有特殊吸收峰,据此可由吸光值计算出样本中木糖的含量。
最低检出限:0.0007 mg/mL
线性范围:0.0078-0.9 mg/mL
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、鼓风烘箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、30-50目筛、EP管、冰和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、植物样本:将供试的植物样本在65℃的鼓风烘箱中烘干,研磨成粉状,过30-50目筛。按质量(g):提取液体积(mL)1 : 50~100比例(建议称取10mg烘干样本,加入0.5 mL提取液),涡旋混匀,在100℃水浴锅中准确水解2 h,然后10000 rpm,室温离心15 min,弃沉淀,取上清液待测。
2、组织样本:按质量(g):提取液体积(mL)1 : 5~10比例(建议称取0.05g样本,加入0.5 mL提取液),研磨匀浆后,在100℃水浴锅中准确水解2 h,然后于10000 rpm,室温离心15 min,弃沉淀,取上清液待测。
3、血清(浆)等液体样本:直接测定。
1、 分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长至554 nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释:将标准品用蒸馏水稀释至0.8、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL的标准溶液备用。
3、 标准液稀释可参考下表:
序号 |
稀释前浓度(mg/mL) |
标准液体积(µL) |
蒸馏水体积(µL) |
稀释后浓度(mg/mL) |
1 |
10 |
100 |
900 |
1 |
2 |
1 |
160 |
40 |
0.8 |
3 |
1 |
200 |
200 |
0.5 |
4 |
0.5 |
200 |
200 |
0.25 |
5 |
0.25 |
200 |
200 |
0.125 |
6 |
0.125 |
200 |
200 |
0.0625 |
7 |
0.0625 |
200 |
200 |
0.03125 |
8 |
0.03125 |
200 |
200 |
0.015625 |
实验中每个标准管需50µL标准溶液。
4、 操作表(在0.6 mL EP管中操作):
试剂名称(μL) |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
50 |
- |
- |
标准溶液 |
- |
50 |
- |
蒸馏水 |
- |
- |
50 |
试剂一 |
250 |
250 |
250 |
涡旋混匀,准确沸水浴8min(EP管盖紧并用封口膜密封,避免水分散失影响体系),冰浴冷却至常温,测定554nm下的吸光度A,分别记为A测定管、A标准管、A空白管,计算ΔA标准=A标准管-A空白管,ΔA测定=A测定管-A空白管。标准曲线和空白管只需测1-2次。 |
1、标准曲线的绘制:
根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。
2、D-木糖含量的计算:
(1)植物中木糖含量(mg/g)=x×V提取÷W1=0.5x÷W1
(2)组织中木糖含量(mg/g)=x×V提取÷W2=0.5x÷W2
(3)血清(浆)木糖含量(mg/mL)= x×V样÷V样=x
V样:加入样本体积,0.05 mL;V提取:加入提取液的体积,0.5 mL;W1:植物样本的质量,g;W2:组织样本的质量,g。
注意事项:
1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、 试剂一B因有强烈刺激性气味,过多吸入对人体有害,故建议在通风橱中进行操作。
1、 称取0.05g卫矛茎加入0.5mL提取液进行样本处理,取上清后稀释2倍按照测定步骤操作,96孔板测得并计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.345-0.045=0.3,带入标准曲线y=1.5448x-0.0132,计算x=0.203,按照公式计算得:
植物中木糖含量(mg/g)=x×V提取÷W1×2(稀释倍数)=0.203×0.5÷0.05×2=4.06 mg/g。
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Author"Tang Hongting
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Publish_toMa Wenhui
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IF0.0000
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PMIDWang Xia
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