组胺含量检测试剂盒 微量法

产品说明：

组胺（Histamine）是一种有潜在危害的含氮低分子量有机化合物，是由组氨酸在脱羧酶的作用下产生的。当组织受到损伤或发生炎症和过敏反应时，都可释放组胺。组胺广泛存在于各种食品中，摄入过量的组胺会对人体产生危害。组胺会被组胺脱氢酶（HDH）特异性分解，在1-mPMS作用下，电子转移通过WST显色，在470nm下有最大吸收峰，据此可以计算组胺含量。

 

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

 

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、匀浆器/研钵、水浴锅/恒温培养箱、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照质量（g）：提取液一体积（mL）为1：2.5~5的比例（建议称取约0.2g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后，于60℃水浴30min，冷却至室温后于4℃ 10000g离心10min，取0.8mL上清液，再缓慢加入0.15mL提取液二，缓慢吹打混匀至无气泡产生，4℃ 10000g离心10min后取上清待测。

2. 红酒等（酚类含量高）液体：称取粉剂一0.05g，加入500μL液体样本和500μL提取液一，冰浴匀浆后，于60℃水浴30min，冷却至室温后于4℃ 12000g离心10min，取0.8mL上清液，再缓慢加入0.15mL提取液二，缓慢吹打混匀至无气泡产生，4℃ 10000g离心10min后取上清待测。

注：1、提取液二需缓慢加入，加入后会产生大量气泡，建议使用2mL EP管进行操作。

2、样本提取后尽可能在2小时内测定结束，若样本量过多建议分批次处理。

3、含酚类高的样本，前处理时加入粉剂一约0.05g，与样本一起冰浴匀浆。如红酒，前处理时取500μL液体样本加入500μL提取液一，和粉剂一约0.05g（无需准确称量），之后按照液体样本继续进行冰浴匀浆后等后续处理。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至470nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、 试剂一37℃预热15min。

3、 操作表：（在1.5mL EP管或96孔板中依次加入以下试剂）

三、组胺含量的计算

1. 按照蛋白浓度计算

组胺含量（μmol/mg prot）=ΔA测定×C标准÷ΔA标准×V样本÷（V样本×Cpr）×F

=0.1875×ΔA测定÷ΔA标准×Cpr×F

C标准：标准管浓度，0.1875μmol/mL；V样本：加入的样本体积，0.03mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度需自行测定；F：稀释倍数。

2. 按照样本质量计算

组胺含量（μmol/g 质量）=ΔA测定×C标准÷ΔA标准×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）×F =0.223×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F

C标准：标准管浓度，0.1875μmol/mL；W：样本质量，g；V上清：提取时上清液体积，0.8mL；V提取液二：加入的提取液二体积，0.15mL；V提取液一：加入的提取液一体积，1mL；F：稀释倍数。

3. 按照液体体积计算

组胺含量（μmol/mL）

=ΔA测定×C标准÷ΔA标准×（V上清+V提取液二）÷ [V液体×V上清÷（V提取液一+V液体）] ×F

=0.445×ΔA测定÷ΔA标准×F

C标准：标准管浓度，0.1875μmol/mL；V上清：提取时上清液体积，0.8mL；V提取液二：加入的提取液二体积，0.15mL；V提取液一：加入的提取液一体积，0.5mL；V液体：液体样本体积，0.5mL；F：稀释倍数。