孕酮（PROG）单克隆抗体；孕酮抗体； Progestero

孕酮（PROG）单克隆抗体；孕酮抗体； Progesterone（P）抗体；孕酮偶联抗原；孕酮抗原

英文名称：Progesterone (PROG) monoclonal antibody

孕酮偶联抗原
一、基本概念
孕酮偶联抗原是将小分子激素孕酮（Progesterone）与大分子载体蛋白通过化学方法偶联形成的人工抗原。
核心原理：孕酮属于甾体类小分子（分子量约 314 Da），本身免疫原性较弱，需与载体蛋白（如牛血清白蛋白 BSA、卵清蛋白 OVA 等）结合，形成具有免疫原性的复合物，从而刺激机体产生特异性抗体（如孕酮单克隆抗体或多克隆抗体）。
应用场景：主要用于免疫学检测（如 ELISA、RIA 试剂盒制备）、抗体开发（如孕酮检测抗体的制备）及相关生物学研究。
二、偶联方法与技术要点
（一）常用偶联方法
碳二亚胺法（EDC 法）
原理：通过碳二亚胺（如 EDC）活化孕酮分子中的羧基（若孕酮已修饰羧基基团），与载体蛋白的氨基（-NH₂）形成酰胺键连接。
适用情况：适用于孕酮衍生物（如孕酮 - 3 - 羧甲基肟，Progesterone-3-CMO）的偶联，需预先对孕酮进行化学修饰引入羧基。
琥珀酸酐法
原理：孕酮经琥珀酸酐修饰生成孕酮琥珀酸酯，引入羧基，再通过 EDC 或wu二醛等交联剂与载体蛋白氨基偶联。
wu二醛法
原理：wu二醛作为双功能交联剂，同时连接孕酮（需预先修饰氨基或醛基）和载体蛋白的氨基，形成 Schiff 碱或酰胺键。
重氮法
原理：通过重氮化反应将孕酮酚类衍生物与载体蛋白偶联，适用于含酚羟基的孕酮衍生物。
（二）关键技术要点
孕酮衍生物的选择
需在孕酮分子的非抗原表位区域（如 C3、C17 位）进行化学修饰，避免破坏其与抗体结合的关键结构（如 Δ4-3 - 酮基）。
常见修饰位点：C3 位引入肟基（-C=NOH）或羧甲基肟基，C17 位引入羧基等。
载体蛋白的选择
BSA：免疫原性强，常用于抗体制备；
OVA：常用于检测试剂盒中的包被抗原（减少交叉反应）；
甲状腺球蛋白（Tg）：用于增强免疫原性（适用于难免疫的小分子）。
偶联比例优化
理想偶联比：每个载体蛋白分子偶联 5～20 个孕酮分子。
检测方法：通过紫外分光光度法（如测定 BSA 在 280 nm 的吸光值及孕酮衍生物在特定波长的吸光值）计算偶联比。
偶联效果验证
免疫原性验证：免疫动物后检测血清抗体效价（如 ELISA 法）；
结构验证：通过质谱（MS）、核磁共振（NMR）确认偶联位点及结合方式。
三、主要应用
抗体开发与检测试剂盒制备
抗体制备：作为免疫原刺激动物（如小鼠、兔子）产生孕酮特异性抗体（多克隆或单克隆）。
检测试剂盒核心组分：
包被抗原：孕酮 - BSA 偶联物用于 ELISA 板包被，结合待检样本中的抗体或竞争游离孕酮；
酶标抗原：孕酮 - 辣根过氧化物酶（HRP）偶联物用于竞争法检测。
免疫学检测方法
竞争法 ELISA：
样本中的游离孕酮与包被抗原竞争结合有限量的孕酮抗体，通过酶标二抗显色强度反推样本孕酮浓度。
应用：临床检测血清、尿液中孕酮水平（如监测妊娠、黄体功能不全等）。
化学发光免疫分析（CLIA）：类似 ELISA 原理，通过化学发光信号定量检测。
生物学研究
免疫组化（IHC）：制备孕酮偶联抗原的抗体，定位组织中孕酮受体或结合蛋白的分布。
中和实验：偶联抗原制备的抗体可用于阻断孕酮的生物学作用，研究其在胚胎着床、子宫内膜发育等过程中的机制。
四、典型应用场景：孕酮检测试剂盒
组分    作用    原理
孕酮偶联抗原（如孕酮 - BSA）    包被抗原    固定于微孔板表面，与样本中游离孕酮竞争结合抗体
孕酮单克隆抗体    识别抗体    特异性结合孕酮，标记物可为酶（HRP）或发光基团
标准品    定量参考    提供已知浓度的孕酮溶液，绘制标准曲线
酶底物 / 发光底物    信号生成    与标记物反应产生可检测信号（如吸光度、发光强度）
五、注意事项与挑战
交叉反应控制
孕酮与其他甾体激素（如睾酮、皮质醇）结构相似，需通过偶联位点设计（如优先修饰 C3 位）和抗体筛选降低交叉反应。
稳定性与保存
偶联抗原需避光、低温（4℃或 - 20℃）保存，避免载体蛋白变性或偶联键断裂。
临床检测干扰因素
样本中的内源性物质（如胆红素、血红蛋白）可能干扰检测，需通过预处理（如血清稀释、离心）或试剂盒优化消除。

孕酮抗体
一、基本概念
孕酮抗体是一类能特异性识别孕酮（Progesterone）分子的免疫球蛋白，主要通过免疫系统产生或人工制备。其核心功能是结合孕酮，阻断或介导其生物学效应，或用于检测样本中的孕酮水平。

分类：

多克隆抗体（Polyclonal Antibody）：由多种 B 细胞克隆产生，可识别孕酮分子的多个抗原表位，来源广泛（如兔、羊等动物免疫血清）。

单克隆抗体（Monoclonal Antibody）：由单一 B 细胞克隆分泌，仅识别孕酮的单个特定表位，特异性高、批次一致性好（如小鼠杂交瘤细胞制备）。

二、制备方法
（一）多克隆抗体制备
免疫原制备
孕酮需与载体蛋白（如 BSA、OVA）偶联形成人工抗原（如孕酮 - BSA），增强免疫原性（详见孕酮偶联抗原）。
动物免疫
常用动物：兔子、山羊、绵羊（因其血清量大，适合大规模制备）。
免疫流程：
初次免疫：皮下或肌肉注射孕酮偶联抗原（佐剂增强免疫反应，如弗氏完全佐剂）；
加强免疫：每隔 2～4 周注射抗原（弗氏不完全佐剂），共 3～5 次；
采血检测：末次免疫后 7～10 天采集血清，通过 ELISA 测定抗体效价（效价≥1:10,000 视为合格）。
抗体纯化
通过硫suan铵沉淀法粗提，再经 Protein A/G 亲和层析或抗原亲和层析纯化，去除非特异性抗体。
（二）单克隆抗体制备（杂交瘤技术）
动物免疫：选用小鼠（如 Balb/c 小鼠），流程与多克隆抗体类似，但更注重抗体特异性筛选。
细胞融合：取免疫小鼠的脾细胞（含 B 淋巴细胞）与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
克隆筛选与鉴定
通过有限稀释法筛选单细胞克隆，利用间接 ELISA 或竞争 ELISA 检测克隆上清液，筛选能特异性结合孕酮且不与其他甾体激素（如睾酮、雌二醇）交叉反应的阳性克隆。
扩大培养与腹水制备
阳性克隆可在体外培养（分泌抗体至培养液）或接种至小鼠腹腔生成腹水，后者抗体浓度更高（可达 mg 级 /mL）。
三、作用机制与功能
中和孕酮生物学活性
抗体与孕酮结合后，阻断其与受体（如孕酮受体 PR）的结合，抑制孕酮介导的生理过程（如子宫内膜增厚、胚胎着床）。
应用场景：
研究孕酮在生殖调控中的作用（如通过抗体中和孕酮，观察动物妊娠失败模型）；
潜在避孕或治疗孕激素依赖性疾病（如子宫内膜异位症）的药物开发方向。
检测与定量孕酮
利用抗体与孕酮的特异性结合，开发免疫学检测方法（如 ELISA、CLIA、化学发光法），用于临床或科研中孕酮浓度的测定。
核心原理（以竞争法 ELISA 为例）：
包被抗原（孕酮 - OVA）与样本中的游离孕酮竞争结合有限量的孕酮抗体；
酶标二抗（如羊抗鼠 IgG-HRP）结合抗体后，通过底物显色强度反推样本孕酮含量（吸光度与孕酮浓度呈负相关）。
四、主要应用领域
（一）临床检测
生殖健康监测
妊娠诊断：孕早期血清孕酮水平可反映黄体功能，辅助判断胚胎发育情况（如孕酮＜5 ng/mL 提示妊娠失败风险）。
内分泌疾病诊断：
多囊卵巢综合征（PCOS）：部分患者孕酮分泌异常；
肾上腺皮质增生：可能伴随孕酮前体物质（如 17 - 羟孕酮）升高。
辅助生殖技术（ART）
监测促排卵周期中孕酮水平，避免过早黄体化影响卵子质量；
胚胎移植后评估子宫内膜容受性，指导黄ti酮补充治疗。
（二）科研与生物技术
免疫组化（IHC）与免疫荧光（IF）
利用孕酮抗体定位组织中孕酮受体或结合蛋白的分布（如子宫内膜、胎盘、垂体细胞），研究其在生理或病理状态下的表达差异。
中和实验与信号通路研究
通过抗体阻断孕酮与受体结合，探索孕酮在细胞增殖、凋亡、分化中的调控机制（如乳腺癌细胞中孕酮的促增殖作用）。
药物研发
作为工具抗体筛选孕酮受体拮抗剂（如米非司酮类似物），或用于抗体 - 药物偶联物（ADC）靶向递送治疗孕激素依赖性肿瘤。
（三）畜牧业与农业
动物繁殖管理：检测奶牛、母猪等家畜的孕酮水平，监测发情周期、妊娠状态或流产风险，提高繁殖效率。
水产养殖：研究鱼类孕酮在性别分化、性腺发育中的作用，优化种苗培育技术。