手机验证
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS
适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒
外泌体等细胞外囊泡(EV: Extracellular Vesicle)不仅参与排放生物体内的废弃物,同时也是细胞间的通信媒介。根据分泌的细胞不同,EV的特性及其内含物(核酸、蛋白质、脂质等)也有所差异,目前正在尝试将参与疾病的细胞来源EV及其内含物作为生物标记应用于“液体活检”,即通过体液样品诊断疾病。
为实现液体活检的开发和应用,需要从大量的样品中高效地分离和纯化EV。但超速离心法等传统方法单次可处理的样品数有限,从多个样品中分离和纯化EV需要花费庞大的人力和物力。
因此,FUJIFILM Wako开发了EV分离纯化用试剂盒MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS,适用于提取核酸和蛋白质的自动提取设备(如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等)。本试剂盒采用与金泽大学的华山教授共同开发的EV分离纯化技术“PS亲和法”1),配合自动提取设备,可同时分离和纯化高纯度且低损伤EV的样品上限为96份。
◆产品概要
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS是使用PS亲和法分离和纯化细胞外囊泡(EV)的试剂盒,适用于自动提取设备(如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等)。由于可从多达96份样品中分离和纯化EV,因此也适用于利用EV进行生物标记的探索和高通量筛选 (High-throughput screening,HTS) 。
特点
● 配合自动提取设备,同时可分离和纯化EV的样品 ● 使用自行研发的分离纯化技术“PS亲和法”,可 |
适用样品(示例)
● 细胞培养上清 ● 血清 ● 血浆 ● 尿液 ● 唾液 |
适用自动提取设备(分离成果经FUJIFILM Wako验证的设备)
● KingFisher™ Flex(Thermo Fisher Scientific等)
与手动款试剂盒(MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2)的区别
比较本试剂盒与手动分离纯化试剂盒(MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, 产品编号:290-84103),两者的区别如下表所示。另,EV的回收效率基本持平。(参考下文“性能数据”)
自动提取 (MagCapture™ EV Isolation |
手动提取 (MagCapture™ Exosome Isolation |
|
Tim4和磁珠的结合方法 | 直接与磁珠结合 (无需磁珠与Tim4结合的步骤) |
通过生物素-亲和素系统与磁珠结合 (需要磁珠与Tim4结合的步骤) |
洗脱缓冲液中的表面活性剂浓度 | 高 (抑制了磁珠的损耗) |
低 |
洗脱缓冲液中的EDTA浓度 | 高 (减少了洗脱步骤的次数) |
低 |
◆原理
PS亲和法是FUJIFILM Wako研发的EV分离方法,使用了与存在于EV表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合的Tim4。
通过PS-Tim4结合的高特异性和螯合剂,可在完整状态下温和地洗脱高纯度EV。
特异性结合
|
洗脱
|
◆实验方案
使用KingFisher™ Flex分离纯化EV(进行从亲和反应到洗脱一系列过程时)
※将亲和反应和洗脱步骤作为单独的程序分别进行,并使用新的tip comb进行洗脱,可能可以减少样品中的杂质。更多信息请参阅使用说明书。
实验方案的详细内容和设置示例请查阅使用说明书。
◆数据
与手动试剂盒(MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2)比较的性能数据
通过NTA,比较分离的粒子数
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto,自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual,手动提取),从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清(COLO201)中分离和纯化EV。通过Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)确认EV的粒子数
【结果】
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的粒子数。
通过ELISA,比较分离的粒子数
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取),从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清(COLO201)中分离和纯化EV。然后使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) (产品编号:298-80601)确认EV的回收率。
【结果】
MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的回收率。
通过蛋白质组学分析,比较分离的蛋白质种类、蛋白量
使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取)分离和纯化EV。蛋白质组学分析回收的EV溶液。
(1)鉴定的蛋白质种类
【结果】
在4次实验中,MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS与手动试剂盒相比,鉴定的蛋白质数量始终更多、再现性更高。
(2)EV标记蛋白质的量
【结果】
分别使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒进行分离的EV中所含的EV标记蛋白质之间并无显著差异,自动化对EV的回收率没有影响。
(3)非EV标记的量(以白蛋白为例)
【结果】
与手动试剂盒相比,使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS纯化分离的非EV标记物白蛋白量更少,表明可回收杂质更少的EV。
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
293-96401 | MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS HTS用MagCapture™ EV提取试剂盒PS |
96 tests | 基因研究用 |
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
294-84101 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS Ver.2 |
2 tests | 基因研究用 |
290-84103 | 10 tests | 基因研究用 |
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
131-19491 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 细胞外囊泡(EV)纯化分离柱 PS |
1 mL | 基因研究用 |
137-19493 | 5 mL | 基因研究用 | |
295-96601 | MassivEV™ Purification Buffer Set MassivEV™ 细胞外囊泡(EV)纯化缓冲液套装 |
1mL×10回用 (5mL×2回用) |
基因研究用 |
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
058-09261 | EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(超滤用) |
1 mL | 基因研究用 |
050-09461 | EV-Sav™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent for in vivo EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(动物体内实验用) |
1 mL | 基因研究用 |
点击此处下载外泌体研究产品目录册
点击此处查看更多外泌体系列产品
点击此处查看更多外泌体系列产品技术和应用文章
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
参考文献
1) Nakai, W. et al.: Sci. Rep. 6(1), 1(2016).
A novel aff-inity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles