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- 信帆生物
- XF11128
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
信帆生物
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100
1、检测原理
本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗原。检测时，加入标准品或样品溶液，克伦特罗抗体及酶标记物，包被抗原和加入样本中的克伦特罗竞争性地与克伦特罗抗体结合后，再与酶标记物形成抗原抗体复合物，用TMB底物显色；加入反应终止液，在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。
2、检测范围
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。
3、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂
（1）设备
微孔板酶标仪(450nm)
振荡器
离心机
微量移液器：20μL～200μL,100μL~1000μL
容量瓶：100mL，500mL，1000mL
（2）试剂
氢-氧-化钠、浓盐酸、乙酸乙酯
- 溶液的配制
配液1：0.1M盐酸溶液
量取0.86mL浓盐酸加去离子水混匀定容至100mL
配液2：1M盐酸溶液
量取8.6mL浓盐酸加去离子水混匀定容至100mL
配液3：0.1M氢-氧-化钠溶液（组织样本）
称0.4gNaOH加去离子水混匀溶解，定容至100mL
配液4：1M氢-氧-化钠溶液（饲料样本）
称4.0gNaOH加去离子水混匀溶解，定容至100mL
配液5：-0.1M盐酸（组织样本）
与0.1M盐酸溶液按体积比84:16混匀
- 样本前处理方法
处理任何样本时，都须注意：
实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。样本处理步骤：
尿样
- 尿样（若浑浊可以4000转/分 离心5分钟，取清亮部分）,取20μL进行分析。
- 不用时应冷冻保存。
畜禽组织（鸡、鸭、猪肌肉/肝脏等）
- 称取2±0.05 g匀浆的样品于50mL离心管中，加入6mL-0.1M盐酸，振荡5分钟；室温4000转/分以上离心10分钟；
- 取上清3mL，加2mL 0.1M氢-氧-化钠溶液，6mL乙酸乙酯，振荡5分钟；室温4000转/分，以上离心10分钟；
- 取全部上清至干净玻璃试管中，于56℃水浴下氮气/空气吹干；
- 加1mL去离子水复溶，振荡30秒。
- 取20μL进行分析。
饲料
- 用食品粉碎机或乳钵研碎饲料样品，称5±0.05 g研碎的饲料样品，加10mL；用振荡器剧烈震荡5分钟，室温3000转/分离心5分钟；
- 取3mL上层清亮有机相至10mL干净的玻璃试管中，于50-60℃氮气流下吹干。
- 加入1mL正己烷，用涡旋仪涡旋30秒；再加入1mL去离子岁混合，用涡旋仪涡旋1分钟，3000转/分离心5分钟；去除上层正己烷相。
- 取下层20μL进行分析。
7、酶联免疫检测步骤
测定前须知：
- 使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。
- 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
- 在使用中不要让微孔干燥。
- 在ELISA分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
- 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用该板膜盖住微孔板。
- 将所需试剂从冷藏环境中取出，在室温下平衡30分钟，每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均需做2个平行试验。
- 加标准液或样品液20μL到相应的微孔中，然后加20μL酶标记物，80μL抗体工作液，用膜盖好，25℃下避光反应30分钟。
- 洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加去离子水 250mL/孔，每次浸泡15~30秒，充分洗涤4~5次，用吸水纸拍干。
- 显色：每孔先各加入底物液A 50μL，再各加入底物液B 50μL，轻轻晃荡混匀，并在25℃下避光反应15分钟。
- 读数：每孔各加50μL终止液，在酶标仪于450nm处测定OD值（建议用450/630nm双波长检测，在5分钟内读完数据）。
所测得的标准液或样品吸光度的平均值（B）除以di一个标准液（0标准液）的吸光度（B <苏> b>0 ）值再乘以100%，得到百分吸光度值。
百分吸光度值（%）＝B/B <苏> b>0 ×100%
以标准品浓度的10为底的对数为X轴， 百分吸光值为Y轴，绘制标准曲线。将样本的百分吸光值代入标准曲线，从标准曲线上读出样本所对应的值，作为10的幂，乘以稀释倍数，即为样品中所含克伦特罗的量。利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。/
精密度：
试剂盒的变异系数均小于10%
10、注意事项
- 室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
- 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
- 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。如不慎滴漏到皮肤上，请尽快用水冲洗。
- 不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
- 保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
- 显色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450nm）值小于0.5（A450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。
- 在加入底物液后，一般显色15分钟即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20分钟（或更长），但不得超过30分钟。反之，则减短反应时间。
- 该试剂盒佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
贮藏条件：在2～8℃保存试剂盒
保存期：本试剂盒有效期为12个月。
克伦特罗检测试剂盒
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文献和实验一、反应曲线 首先，我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图，可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，如下图所示： 二、反应原理 对于延迟区来讲，无规律可寻，对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法，是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点，并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等，此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
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