GC Lymphotec iStock细胞冻存液

获PMDA认证

GC Lymphotec iStock细胞冻存液

 

GC Lymphotec Inc.的iStock细胞冻存液不含血清和人以外的动物来源成分，适用于人ES/iPS细胞和再生医疗研究。

iStock可确保长期稳定性，使用本产品悬浮回收的细胞，可置于超低温冷冻冰箱速冻并长期储存。细胞也可冷冻后在-80°C下保存12小时，然后在液氮中储存。

◆特点

● 无血清及其他动物来源成分

● 无需程序化冷冻仪

● 可在-80°C快速冷冻且可长期储存

● 已取得PMDA认证，可用于再生医疗产品原料

● 无需制备冻存液

● 冷藏保存的保质期为3年

 

◆各冻存液与iStock的性能比较

人外周血单核细胞（PBMC）	小鼠ES细胞
从 9 名知情同意的健康者血液中，分离出外周血单核细胞（PBMC），在包被了OKT3抗体的培养瓶中，使用GC Lymphotec淋巴细胞培养基培养4天。 使用含血清冻存液和iStock，将增殖的细胞调整至1.5×107 cells/mL，采用慢速冷冻法，冷冻于-80℃。第二天，转移至液氮罐中，保存7天后复苏，比较回收率（复苏后细胞数/冻存前细胞数×100%）。 ⇒iStock和含血清冻存液显示相同的复苏率。	使用10% DMSO/Medium、iStock、竞品A、竞品B将增殖后的小鼠ES细胞调整浓度至4×106 cells/mL。分装1 mL悬液至冻存管（n=4），不使用freezing container，在-80°C下进行冻存。第二天转移至液氮，储存一周。 在37°C下快速复苏，离心后，在培养基中悬浮并检测活细胞数，比较复苏率。 ⇒与其他冻存液相比，iStock显示更高的复苏率。

 

人iPS细胞
冷冻3×106 cell/tube人iPS细胞（n=3），使用液氮储存。 解冻后，接种至培养容器，3天后检测细胞数。 ⇒与竞品相比，使用iStock冻存液的iPSC，复苏后的增殖情况更优异。	使用1 mL冻存液悬浮3.0×106 cells的人iPS细胞，转移至冻存管，并使用-80°C的冷冻仪冷冻细胞（各冻存液分别冷冻3管），2天后转移至液氮罐进行保存。使用加热至37°C的干浴器解冻液氮（液相）保存的冷冻细胞，然后悬浮于2 mL iPS细胞专用培养基，并使用台盼蓝染色计数法测量活细胞（每款冻存液各测量3管，计算平均值）。

使用加热至37°C的干浴器复苏各冻存液冻存的iPS细胞的冷冻管，然后悬浮于iPS细胞专用培养基并离心，通过去除上清，来去除冻存液。分散细胞沉淀，添加2 mL的iPS细胞培养专用培养基，并接种至层粘连蛋白预包被的6孔板的1个孔中，37°C、CO₂浓度5%的条件下培养至第三天。培养结束后，使用细胞解离液解离细胞，并使用台盼蓝染色计数法测量活细胞（每款冻存液各测量3管，计算平均值）

 

细胞球（HEK293T）

实验概要 使用低吸附U底96孔板制备HEK293T细胞球，用竞品A、竞品B和iStock这3款冻存液在-80°C下冷冻储存。冷冻2周后复苏细胞，培养3天并评估增殖能力。 实验结果 使用WST-8检测细胞增殖能力后发现，与竞品A和竞品B冻存的细胞相比，iStock冻存的细胞吸光度的值更高。 以上结果显示，iStock可有效用于HEK293T细胞球的冻存。

 

◆iStock使用方法

1. 细胞冻存   

❶将细胞移至离心管。

❷离心分离（800×g左右，3-5 min），用抽吸器去除上清。向~1.5×107个细胞中加入1 mL的 iStock，缓慢地进行移液。

❸将细胞悬液分注至冷冻管中。

❹在-80℃的低温冷冻箱进行冻存（根据细胞类型，将冷冻管转移至市售的冷冻容器进行冻存）。

❺第二天移至液氮罐中。

 

2. 细胞解冻    

❶在37°C的温水浴中解冻冷冻管。

❷立即与约10 mL的培养液混合。

❸离心分离（800×g左右，3-5 min），用抽吸器去除上清。

❹在适量的培养液中悬浮，转移至培养容器，开始培养。