Polystyrene Particles, 22 um-C

基因芯片实验原理与方法（一）

来源的组织细胞基因的差异表达，则分别提取两种组织细胞的mRNA，反转录成cDNA，分别标记两种不同颜色的荧光(如Cy3和Cy5)，等量混合后与芯片进行杂交反应。杂交反应可以在专用的杂交仪(Hybridization station)或杂交盒(Hybridization chamber)内进行。杂交仪能够容纳多张芯片，有利于杂交过程的自动化和杂交条件的标准化。单个反应可以在杂交盒里进行，斯坦福大学Patrick O.Brown教授领导的实验室将制作杂交盒的详细说明提供在互联网，同时还提供了cDNA

植物蛋白芯片的构建和抗原抗体相互作用的研究

下，用 1 X PBS、0.5% ( V/V )   Tween-20 溶液封闭 2 h。将适当的单克隆抗体稀释液在室温下孵育芯片 2 h，然后用封闭液冲洗两次，每次 10 min。用相应的 Cy3 标记二抗 ( 与一抗物种特异性主相关）室温下进一步孵育 FAST 片基 1 h。在信号检测之前，片基在室温下用 1 X PBS/0.5% ( V/V ) Tween-20 冲洗两次，每次 30 min，然后用 1X PBS 冲洗两次，每 次 20 min。 如果使用单克隆抗 Phy B 抗体 Pea-25

生物芯片入门（四）：基因表达谱芯片实验操作2

。 2. 标准化处理（Normalization）：由于样本差异、荧光标记效率和检出率的不平衡，需对cy3和cy5的原始提取信号进行均衡和修正才能进一步分析实验数据，Normalization正是基于此种目的。Normalization的方法有多种：一组内参照基因（如一组看家基因）校正Microarray所有的基因、阳性基因、阴性基因、单个基因。 3. Ratio分析（Ratio Analysis）：cy3/cy5的比值，又称R/G值。一般0.5～2.0范围内的基因不存在显著表达差异，该范围之外则认为基因