人关节滑膜成纤维细胞

一、基本信息

细胞名称	人关节滑膜成纤维细胞	组织来源	子宫组织
商品货号	YS-01X8216	种属来源	人
包被条件		换液频率	每2-3天换液一次
生长特性	贴壁培养	细胞形态	成纤维样细胞
传代特性	细胞特性确定传代	消化液	0.25%胰蛋白酶
培养基	原代成纤维细胞培养体系	培养条件	气相：  空气，95%；CO2 ，5%

 

细胞简介

滑膜是关节囊的内层，淡红色，  平滑闪光，薄而柔润，由疏松结缔组织组成。关 节腔内的所有结构，  除关节软骨、半月软骨板以外,即便是通过关节腔的肌腱、韧 带等均全部为滑膜所包裹。 滑膜分泌滑液，  在关节活动中起重要作用。正常滑膜分为两层，即薄的细胞层(内 腔层)和血管层(内膜下层)，是血管丰富的关节囊内膜，贴附于非关节面部分，覆 盖于关节囊内的骨面上，  不在软骨面上，  此部分称为边缘区或“裸区”。滑膜呈 粉红色，光滑发亮、湿而润滑，  有时可见绒毛，内含胶原性纤维。 滑膜细胞有A、  B两型。巨噬细胞样A型细胞，  表面有丝状伪足、浆膜内陷、囊泡  、线粒体、溶酶体、胞浆纤维和高尔基体，具有吞噬功能；  B型成纤维样滑膜细胞 (FLS) ，有高浓度的内质网结构，  是介导 RA 关节破坏的主要细胞。

方法简介：实验室分离的人关节滑膜成纤维细胞采用组织贴块法并结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测：实验室分离的人关节滑膜成纤维细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人关节滑膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
人关节滑膜成纤维细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈成纤维样细胞 ，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，
37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。          
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内
加入5ml完全培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验
器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL
（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。


原代细胞培养方法及注意事项：
1.准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3.处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4.剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7.计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8.培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶盖需拧松半圈。
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