- ￥2800 - 6200
- 上海研生
- YS-01X7976
- 国产
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 肿瘤类型：
否
- 供应商：
上海研生
- 库存：
22
- 生长状态：
贴壁
- 是否是肿瘤细胞：
否
- 细胞形态：
长梭形细胞
- 物种来源：
猪
- 组织来源：
膀胱组织
- 规格：
5×10⁵Cells/T25培养瓶
| 细胞名称 | 猪膀胱平滑肌细胞 | 组织来源 | 膀胱组织 |
| 商品货号 | YS-01X7976 | 种属来源 | 猪 |
| 包被条件 | 换液频率 | 每2-3天换液一次 | |
| 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 长梭形细胞 |
| 传代特性 | 根据细胞特性 | 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 培养基 | 原代平滑肌细胞培养体系 | 培养条件 | 气相：空气，95%；CO2，5% |
| 细胞简介 |
| 膀胱壁由三层组织组成，由内外为粘膜层、肌层和外膜。其中，肌层由平滑肌构成。体外培养膀胱平滑肌细胞不仅为组织工程膀胱，尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基础与前提。 |
质量检测：实验室分离的猪膀胱平滑肌细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
猪膀胱平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
猪膀胱平滑肌细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈长梭形细胞 ，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，
37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内
加入5ml完全培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验
器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL
（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
原代细胞培养方法及注意事项：
1.准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3.处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4.剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7.计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8.培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶盖需拧松半圈。
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文献和实验一、摘要 目的：建立兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定的方法。方法：成年新西兰白兔两只（正常及梗阻各一只），采用酶法分离技术获得膀胱平滑肌细胞后于10%小牛血清的DMEM中培养，观察细胞形态和扩增情况，用爬片染色、电镜、蛋白质α-肌动蛋白（α-actin）鉴定细胞类型。结果：倒置显微镜下观察均呈“谷和峰”样结构、细胞爬片HE染色及电镜检查均证实为平滑肌细胞。免疫组化染色检测α-actin呈阳性反应。从细胞爬片HE染色和免疫组化染色检测α-actin呈阳性反应中我们发现该方法所的膀胱平滑肌细胞
1、麻醉后消毒，下腹正中切口于膀胱颈（结扎处远端约1~2cm），严格无菌操作取出标本、手术台位于超净台旁2、在超净台，40u/ml庆大霉素溶液中浸泡5分钟3、生理盐水漂洗1次4、D－hanks液漂洗1次5、放入D－hanks液中，除去粘膜、粘膜下及浆膜如果是Shame组兔，以10ml注射器抽取约8ml D－hanks液，于粘膜层下注射起泡后，剪去粘膜层，直接剪取平滑肌组织，弃浆膜层及其上未剪下之肌组织。new: 如果是不全BOO兔，则可将膀胱剪成宽约0.5cm之条状，撕去粘膜层后，助手以一眼
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