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文献和实验保留它的活性部分和催化能力。最好在受检标本中不存在相同的酶。另外,它的相应底物易于制备和保存,价格低廉,有色产物易于测定等。在ELISA中,常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP)。在少数商品ELISA试剂中,应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。国产ELISA试剂一般都用HRP制备结合物。HRP是一种糖蛋白,含糖量约为18%,分子量为44000,是一种复合酶,由主酶(酶蛋白)和辅基
相关专题磷酸化评估蛋白激酶将磷酸基团从ATP转移到蛋白多肽底物上的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基,直接影响目标的活性和功能。放射性研究表明,真核细胞中大约30%的蛋白经过磷酸化修饰。这一关键的翻译后修饰调控了广泛的细胞活性,包括细胞周期 、分化、代谢和神经元通讯。此外,异常的磷酸化事件与许多疾病状态相关。在评估磷酸化时,选择的方法可能会有所不同,这取决于多个因素,包括提出的具体问题以及特殊仪器或试剂的可用性。如何检测蛋白磷酸化,本文简要介绍了几种常用方法,并提出了每种方法的优点和缺点
悬液,先用PI染色,再行Hoechest3342染色,进行流式细胞仪分析或荧光显微镜观察。PI及Hoechest3342均使用340nm紫外线激发,前者荧光为红色(620nm),后者荧光为蓝色(480nm)。正常细胞蓝色最强。早期凋亡细胞由于DNA的漏出蓝色稍弱并有少量的红色荧光,晚期凋亡细胞红色荧光加强。坏死细胞红色荧光最强。 膜联蛋白(annexin)V标记 正常细胞的细胞膜磷脂分布是不对称的,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)位于细胞膜内侧,在细胞凋亡时转至细胞膜外
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