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文献和实验Novagen的预制T7Select cDNA文库均以T7Select10-3b制备,材料是经 Novagen的Straight A’s™ mRNA分离试剂盒两次纯化的mRNA。mRNA最长达8 kb以上,经反转录,用Novagen的OrientExpress™ Random Primer cDNA Kit (带甲基化dCTP)克隆。原始库的重组子为>1 x107 pfu,文库的滴度最低为1 x 1010 pfu。所有文库仅经一次包装和扩增。 哪一种Novagen的T7噬菌体载体(T
有终止密码子也可以被表达和展示。这在必须在N-端克隆的M13是无法进行的。N-端融合克隆cDNA时常会造成麻烦,因为poly(A)区( cDNA中为oligo d(T))常位于翻译终止密码子的下游。T7与M13相比优势明显 T7Select的优势 解释 是在细胞质中表达的裂解性噬菌体 与M13不同,T7是裂解
分析,并选取部分筛选出的差异表达miRNA,以半定量逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)和Western blot分析其相对应的靶mRNA和目的蛋白表达状况。作者认为液相芯片筛选差异表达miRNA可为研究HCC发病机制和诊断治疗提供新的思路。 3.6 研究细胞信号转导途径 Mu[19]为研究resistin是否对人内皮细胞有直接作用,将人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)用无血清培养基培养后,用resistin处理,然后取细胞裂解液用Bio Rad公司的“磷酸化蛋白和总靶蛋白
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