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文献和实验的优势在于迅速、直接、灵敏且特异性强,即使当体内mCTL水平低于1%,用MHC2Ⅰ抗原肽四聚体法仍可直接测到准确的值,比LDA 敏感度要高5~10倍。但该技术也存在较多应用上的困难:除了合成及稳定MHCⅠ类分子的技术困难外,最主要缺点是表位的选择。由于每次反应只能分析单一的抗原表位,而MHCⅠ类分子结合的各种表位,能否形成CTL反应,却随着基因背景及时间的变化而变化,因此选择正确的表位就显得尤为重要。优势表位的筛选可以通过Elispot 来进行,但对整个肽库进行扫描,并不是一件很容易的事。当然,生物
ELISPOT与ELISA 、有限稀释法、四聚体法、Cr51释放法、胞内CK染色法比较
,比LDA 敏感度要高5~10倍。但该技术也存在较多应用上的困难:除了合成及稳定MHCⅠ类分子的技术困难外,最主要缺点是表位的选择。由于每次反应只能分析单一的抗原表位,而MHCⅠ类分子结合的各种表位,能否形成CTL反应,却随着基因背景及时间的变化而变化,因此选择正确的表位就显得尤为重要。优势表位的筛选可以通过Elispot 来进行,但对整个肽库进行扫描,并不是一件很容易的事。当然,生物信息学的运用对表位的筛选有很大的帮助。同时,有研究结果表明,并非所有经过Tetramer 鉴定的阳性细胞都有确切的功能
1 - 1 7p15 识别MHC/多肽复合物 TCRδ链 40~60 1 - 1 14q11.2 识别MHC/多肽复合物 TCRγ链 25~28 - 1 - 11q23 TCR信号传导 TCRδ链 20 - 1 - 11q23 TCR信号传导 TCRε链 20 - 1 - 11q23 TCR信号传导 续表1 成 员 分子量 (kDa) Ig结构域类型 人染色体 定 位 主要功能 C1 C2 V MHC抗原及相关分子 MHCⅠ类抗原α链 44
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