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信帆生物
冻干粉:冻干菌粉、冻干管,一次性用完,不得留存
斜面:活化好的菌可直接使用,短期保藏,取用方便
菌液:直接在液体培养基中接种新鲜的培养物培养规定时间后形成的菌悬液,活菌、使用方便
平板:冷却凝固后的固体培养基在无菌培养皿中形成的培养基固体平面
传代方法:
①准备上述平板2块;
②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;
③吸取0.5mL无菌水打入冻干管,充分溶解菌粉后,打入2块平板,200μL/个,涂布均匀;
④将平板置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。
菌种鉴定:
(1)传统的生化方法对微生物进行正确的分类存在较大的困难。而随着分子生物学技术的发展,核酸序列分析已被广泛的应用于微生物鉴定中,通过基因序列分析,可以快速准确地对微生物的种属进行鉴定。目前、原核生物的种属鉴定主要采用16S rDNA测序技术,真核生物主要采用18S rDNA或ITS测序。
(2)16S rDNA是编码原核生物核糖体小亚基Rrna(16S rRNA)的DNA序列,存在于所有细菌染色体基因组中。16S rDNA分子大小适中,突变率小,是细菌系 统分类学研究中最常用,最有用的“分子钟”。其序列包含9个可变区(variable region)和10个恒定区(constant region)。保守序列区域反映了生物物种 间的亲缘关系,而高变序列区域则能体现物种间的差异。16S rDNA的序列特征为不同分类级别的近缘种系统分类奠定了分子生物学基础。
(3)与细菌多样性分析类似,在真核微生物中也有三类核糖体RNA(rRNA),包括5.8S rRNA、18S rRNA和28S rRNA。18S rRNA基因是编码真核生物核糖体小亚基的DNA序列,其中既有保守区,也有可变区(V1-V9,没有V6区)。保守区域反映了生物物种间的亲缘关系,而可变区则能体现物种间的差异,适用于作种级及以上的分类标准。其中,V4区是文献中常用的检测片段。
(4)ITS序列是内源转录间隔区(Internally Transcribed Spacer),位于真菌18S、5.8S和28S rRNA基因之间,分别为ITS 1和ITS 2。 在真菌中,5.8S、18S和28S rRNA基因具有较高的保守性,而ITS由于承受较小的自然选择压力,在进化过程中能够容忍更多的变异,在绝大多数真核生物中表现出极为广泛的序列多态性。同时,ITS的保守型表现为种内相对一致,种间差异较明显,能够反映出种属间,甚至菌株间的差异。并且ITS序列片段较小(ITS 1和ITS 2长度分别为350 bp和400 bp),易于分析,目前已被广泛用于真菌不同种属的系统发育分析。
(5)使用PCR技术,对16S rDNA,18S rDNA或ITS序列进行扩增,然后PCR产物进行测序,即可获得相应的碱基序列。然后将序列在NCBI上进行Blast比对,即可获知与该序列同源性较高的已知序列,为确定菌种的分类学地位提供依据。
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文献和实验小多孢菌科 小多孢菌科 (Micropolysporaceae) 放线菌目的1科。在气生菌丝和(或)基内菌丝上形成不足20个孢子的短链。现有5个属。 小多孢茵属 孢子直径1.2~1.5微米,在侧枝端基向形成;细胞壁化学组分Ⅳ型,即以内消旋二氨基庚二酸以及阿拉伯糖和半乳糖为特征组分;DNA中的G C克分子含量为66.2~67.5%。常见于土壤、堆肥、干草和谷物中。干草小多孢菌是过敏性呼吸道感染“农民肺病”的病因之一。代表种为短链小多孢菌,分离自结核
酸为特征性组份,有时还有少量左旋或羟基二氨基庚二酸;含有阿拉伯糖和木糖;DNA中的G C克分子含量为71.4~72.8%。 木属菌喜潮湿,常见于湖、河的水和泥中,能够分解一些不易分解的有机质,如纤维素、几丁质、木聚糖等。产生多种抗生素,特别是氨基糖苷类,如对绿脓杆菌有特效的庆大霉素等。代表种为青铜小单孢菌。 放线单孢菌属 基内菌丝上的长柄顶端形成单个大孢子,直径2.5~3.0微米,无气生菌丝。至今只记述葡萄牙放线多孢菌1种。
一种植物贮存同多糖,由D-葡萄糖残基连接而成。含75~85%的支链淀粉(amylopectin)和15~25%的直链淀粉(amylose)。直链淀粉无分支,是数百个D-吡喃葡萄糖残基通过α(1→4)糖苷键互相连接构成的,分子量由几千到几十万,视植物种类和生长时期而异,多糖链呈螺旋形,由氢键维系。大于60个葡萄糖残基构成的直链淀粉与碘生成的络合物呈蓝色,碘原子的行列正好嵌入直链淀粉螺旋的中心。用酸或酶水解淀粉,依水解程度不同生成长短不同的糖链(糊精),它们与碘作用依次呈现红色
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