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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 肿瘤类型:
否
- 供应商:
上海研生
- 库存:
47
- 生长状态:
贴壁
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 细胞形态:
成纤维细胞样
- 物种来源:
大鼠
- 组织来源:
腹膜组织
- 规格:
5×10⁵Cells/T25培养瓶
| 细胞名称 | 大鼠腹膜间皮细胞 | 组织来源 | 腹膜组织 |
| 商品货号 | YS-01X7486 | 种属来源 | 大鼠 |
| 包被条件 | PLL(0.1mg/ml) | 换液频率 | 每2-3天换液一次 |
| 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
| 传代特性 | 贴壁 | 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 培养基 | 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 | 培养条件 | 气相:空气,95%;CO2,5% |
| 细胞简介 |
| 大鼠腹膜间皮细胞分离自腹膜组织;腹膜是存在于高等脊椎动物腹腔中的一层黏膜,主要由间皮细胞构成,藉由结缔组织的支持所形成的一层膜状组织。腹膜包覆大部分腹腔内的器官,能分泌黏液润湿脏器的表面,减轻脏器间的摩擦。腹腔脏器的血液、淋巴和神经组织经由腹膜与外界相连;腹膜也具有吸收撞击保护内脏的效果。腹膜(peritoneum)为全身面积最大、配布最复杂的浆膜,由皮及少量结缔组织构成,薄而光滑,呈半透明状。衬于腹、盆腔壁内表面的腹膜称为壁腹膜(parietal-peritoneum)或腹壁薄层;覆盖腹、盆腔器表面的部分称为脏腹膜(visceral-peritoneum)腹膜或腹膜脏层。脏腹膜与壁腹膜互相延续、移行,共同围成不规则的潜在性腔隙,称为腹膜腔(peritoneal-cavity)。腹膜腔是脏、壁两层腹膜之间相互移行围成的潜在性间隙。腹膜腔内有少量浆液,在脏器活动时可减少摩擦。腹膜间皮细胞属于上皮组织中的单层扁平上皮,是覆盖于腹膜表面的一层细胞。间皮细胞是构成间皮的细胞,正常大小约为15-25微米,细胞常呈圆形或者卵圆形。其功用是提供润滑,使器官与器官、器官与胸膜与腹膜间都能得到良好的保护,不会互相磨损受伤。而间皮所生产的润滑和保护作用就是靠间皮细胞所分泌的物质来达成,分泌物多半为细胞外基质、玻尿酸类物质。 |
质量检测:实验室分离的大鼠腹膜间皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
大鼠腹膜间皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
大鼠腹膜间皮细胞是一种贴壁细胞,细胞形态呈成纤维细胞样 ,在技术部标准操作流程下,细胞可传2-3代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,
37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内
加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验
器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL
(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
原代细胞培养方法及注意事项:
1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
3.处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的
混合液中30~60分钟。
4.剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒
入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化
时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即
终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,
加入适量含有血清的培养液。
7.计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在
7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。
8.培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶盖需拧松半圈。


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文献和实验模型制备方法 实验动物选择7-9月龄的雌性SD或Wistar大鼠(大鼠月龄越大,其病理表现越接近成年人疾病特点)。 动物麻醉后,取仰卧位固定。腹部备皮、消毒、铺洞巾。以腹正中线距阴道口3.5cm 处为切口,向下切开皮肤1.5-2cm,钝性分离皮下组织,切开肌层、腹膜,打开腹腔。拨开脂肪层找到子宫(膀胱背侧),沿着输卵管轻柔拉出,其末端可见脂肪包裹呈粉红色桑葚状的卵巢,用组织钳夹闭卵巢下输卵管,将输卵管结扎,剪除卵巢,将断端输卵管送回腹腔,同样方法去除另一侧卵巢。逐层
3、间皮细胞:增多表明腹膜受到刺激或损伤,如结核病并发积脓、慢性恶性积液等。 4、浆细胞:出现见于慢性炎症和肿瘤 5、恶性肿瘤细胞:腹腔积液细胞学检查可以区分鳞癌、腺癌(图5-3-1)和未分化癌,间皮瘤和腺癌,淋巴瘤和反应性淋巴细胞增多症。腹腔转移性肿瘤中以卵巢癌(32%)、乳腺癌(24%)、淋巴瘤(16%)、胃癌、大肠癌多见,其次为肝癌、胆囊癌、胆管癌、子宫体癌等。腹腔积液细胞学诊断恶性肿瘤的敏感性为40%~60%。原发性恶性间皮瘤较少见,约占1%左右。 6、腹水中偶见微丝
125)。用放射性同位素131I标记OC125后可进行CA125的检测。据Bast的检测结果,CA125不但存在于卵巢浆液性上皮癌中,尚在下列组织中检测出CA125抗原:①间皮细胞组织,包括腹膜、胸膜及心包膜。②副中肾管上皮,包括卵巢上皮癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌及间皮细胞瘤等。在以上各组织中,腹膜、胸膜和心包膜来源于体腔上皮。输卵管、子宫内膜和宫颈内膜来源于副中肾管,后者亦来源于体腔上皮。故腹膜与女性生殖系统均来源于体腔上皮,有共同的胚胎来源和共有抗原CA125。因此CA 125不但是卵巢上皮癌的相关
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