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碧云天生产的多能干细胞免疫荧光检测试剂盒(Oct4, 兔抗, 红色荧光),英文名为Pluripotent Stem Cell Immunofluorescence Assay Kit (Oct4 Rabbit mAb, Red),是一种通过免疫荧光染色法检测多能干细胞未分化(undifferentiated)状态的标志物Oct4的多能干细胞检测试剂盒。
本试剂盒中的Oct4兔单抗特异性识别人或小鼠的Oct4,可以结合荧光显微镜或高内涵筛选(High content screening, HCS)等,广泛应用于iPS重编程效果的判定,多能干细胞的干性(stemness)评估,以及干细胞的分化检测等。
本试剂盒提供了固定液、洗涤液、封闭液、一抗、荧光标记二抗、细胞核荧光染色液、封片液,使用时不必再配制其它任何溶液。提供了细胞核荧光染色液,可以把细胞核染成蓝色荧光。使用本试剂盒检测小鼠胚胎干细胞E14TG2a、人类胚胎干细胞H9和小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞的效果参考图1。
图1.碧云天多能干细胞免疫荧光检测试剂盒(Oct4, 兔抗, 红色荧光)检测小鼠胚胎干细胞E14TG2a、人类胚胎干细胞H9和NIH3T3细胞的染色效果图。ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞,去除MEF接种至铺被有BeyoEmbryo™ 0.1%明胶溶液(胚胎细胞培养级) (C0316)的六孔板中培养。H9人胚胎干细胞接种至BeyoEmbryo™ Human Vitronectin (胚胎细胞培养级) (C0318)铺被的六孔板中培养。均培养2-3天后使用本试剂盒做免疫荧光染色。NIH3T3作为阴性对照细胞核无红色荧光,而小鼠胚胎干细胞E14TG2a和人类胚胎干细胞H9细胞核呈现Oct4阳性染色。实际染色效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
本试剂盒中提供的封闭液为碧云天的QuickBlock™免疫染色封闭液,仅10分钟左右即可完成封闭。
使用本试剂盒染色后Oct4呈红色荧光,其最大激发波长为555nm,最大发射波长为565nm;细胞核呈蓝色荧光,其最大激发波长为364nm,最大发射波长为454nm。
Oct4基因也被称为Oct3、POU5F1、Oct3或Oct4,是POU转录因子家族中的一员。在鼠和人体内,它主要表达于胚胎干细胞及生殖干细胞中,对于维持胚胎干细胞的未分化状态和自我更新具有极其重要的作用,分化后的多能干细胞Oct4表达水平大幅下降[1,2]。
如果检测96孔板内的样品,本试剂盒可以检测100-500个样品(抗体重复使用0-4次);如果用于检测6孔板内的样品,通常可以检测25-50个样品(抗体重复使用4-9次);如果检测组织切片至少可以检测50个样品。
包装清单:| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| C3261-1 | 固定液 | 50ml |
| C3261-2 | 洗涤液 | 500ml |
| C3261-3 | 免疫荧光染色封闭液 | 50ml |
| C3261-4 | Oct4兔单抗 | 5ml |
| C3261-5 | 驴抗兔555 | 5ml |
| C3261-6 | 细胞核染色液(DAPI) | 50ml |
| C3261-7 | 抗荧光淬灭封片液 | 10ml |
| — | 说明书 | 1份 |
固定液、细胞核染色液(DAPI) -20ºC保存,其余试剂均4ºC保存,半年有效。其中驴抗兔555和细胞核染色液(DAPI)须避光保存。
注意事项:固定液对人体有害,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
免疫荧光染色时,请注意回收使用过的一抗和二抗。回收后通常至少可以重复使用5次,如果出现浑浊、沉淀等异常现象,应停止使用。
需使用可以观察红色荧光和蓝色荧光的荧光显微镜或高内涵分析仪。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验在免疫荧光染色过程中单染和共染是常用的两种方式,除此之外我们还可能会用到远红外进行染色标记。这相对于前两者实验操作上处理方法是一致的,唯独在样品处理上有所不同,而导致荧光定位标记的颜色增多,相对而言变得复杂。免疫荧光技术主要是通过抗体与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。那么接下来,我们重点来介绍免疫荧光操作方法以及注意事项。操作步骤:1. 首先,在常温下将组织切片用免疫组化笔进行画圈,接着加入 0.1M PB 约 50 微升左右,进行每次 20 分钟的漂洗,漂洗
konglingrufeng 之前实验设计 A组 小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)+阳性诱导剂+培养基 B组 小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)+实验诱导剂+培养基 C组 小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)+阳性诱导剂+实验诱导剂+培养基 D组 小鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)+培养基 诱导相同天数后在免疫荧光结合共聚焦显微镜技术下,半定量测定OPG/RANKL表达,差异有统计学意义
在免疫荧光染色过程中单染和共染是常用的两种方式,除此之外我们还可能会用到远红外进行染色标记。这相对于前两者实验操作上处理方法是一致的,唯独在样品处理上有所不同,而导致荧光定位标记的颜色增多,相对而言变得复杂。免疫荧光技术主要是通过抗体与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。那么接下来,我们重点来介绍免疫荧光操作方法以及注意事项。操作步骤:1. 首先,在常温下将组织切片用免疫组化笔进行画圈,接着加入 0.1M PB 约 50 微升左右,进行每次 20 分钟的漂洗,漂洗
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