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文献和实验RIPA或线粒体分离试剂 蛋白抽提试剂盒的选择蛋白抽提试剂盒的出现弥补了细胞裂解液的应用局限性,特别是针对难提取的样本或者亚细胞器蛋白的提取,例如:针对植物、动物组织/细胞、细菌、酵母等不同样品及细胞核、细胞膜、线粒体、叶绿体、溶酶体等不同亚细胞器的专业提取试剂盒。这类特化试剂盒能够针对目的蛋白的不同来源和不同组织定位进行裂解和提取, 简化实验操作的同时还能提高蛋白提取的得率。以 Sigma 公司的 CelLytic?系列蛋白提取试剂盒为例:一方面,该系列试剂盒有非变性的裂解
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方法。 收获细胞(保证健康的单细胞悬液)。 使用胰蛋白酶-EDTA 溶液 ( T3924 ) 分离上述贴壁细胞。Millicell® Digital Cell Imager(MDCI10000)观察到细胞融合度应为80-90%,且状态良好。 以300 x g离心细胞悬液 5分钟并吸出上清液。将细胞重悬于少量培养物中,例如 3-5 mL 的 3dGRO™ 球状体培养基 ( S3077 ) 注:可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL 圆底聚苯乙烯试管,以实现单细胞悬浮。
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