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- 详细信息
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麦格生物
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文献和实验.--California:Academic Press,c1998.--xiv,368p.24cmSBN0124800408:CNY619.26 原代胚胎成纤维细胞培养 一、实验器材:手术小直剪刀三把、眼科直镊子三把、眼科弯镊子两把、玻璃平 皿三套、200目尼龙滤网、50ML、15ML离心管和手术刀片。以上物品均需要高压灭菌消毒处理。 二、实验试剂:无Ca+2和Mg+2的PBS、0.05%胰酶0.53mmol/L EDTA溶液、小鼠胚成纤维细胞(MEF)生长培养基:高糖DMEM加10%FCS。 三、实验
冻存培养基,然后加入完全生长培养基中。 1、直接铺板方法 取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化。 直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数,细胞接种应该至少在3×105活细胞/ml。 培养细胞12到24小时,更换新鲜的完全生长培养基,去除冻存剂。 2、离心方法 取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化。 把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基,轻轻混匀。 以大约80x g离心2到3分钟。 弃去上清
控制在0. 5~1. 0 L/ Min. 使容器内氧气分压控制在75%±2%. 期间用测氧仪持续监测容器内的氧分压;每2 d打开氧箱更换垫料. 加食. 换水. 替换母鼠。在此高氧环境中饲养5 d. 5 d后即出生第12 d (P12) 返回正常空气环境中继续与母乳共同饲养。对照组幼鼠与哺乳母鼠始终在正常空气环境中饲养。 (5)我的窍门或者心得体会:OIR(氧诱导视网膜病变)小鼠模型是目前最常用的氧诱导视网膜病变模型。该动物模型不受动物性别的影响. 左右眼血管化区域和新生血管的严重
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