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干货：外泌体研究实操中的常见问题解答

做的是外参。外参可以最大限度地降低对限定造成实验的作用，适用于内参表达不稳定的外泌体或暂时未发现合适内参的其他样品，对目的microRNA进行相对定量，替代内参作用。部分文献或许可以类似于U6等作为内参。 16 、下游qPCR检测时C T值过高如何处理？     答：外泌体RNA是微量的，首先样品准备阶段保证样品的质量和数量充足（例如血清建议新鲜样本准备2ml以上）。有实验表明，2ml血清样本提取的外泌体，qPCR检测U6（细胞样本microRNA内参存在）的CT值只有30+，基因CT值在30

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工作稀释度为 1 ： 100 ）和 15 μ l 已处理的第二抗体（最终工作稀释度为 1 ： 2000 ）。 2． 悬液加到少量玻璃棉填充的加样器吸头内。未封闭抗体用冷冻封闭液（至少 5 倍于柱体积）洗脱。 3． 用冷的封闭液调节洗脱出的抗体浓度至原先浓度的 1/20 。加入硫柳汞（终浓度 0.01 ％）。 铺平板 1． 如上所述铺制平板，作如下修改： a. 另外一支含 2.5ml 顶层琼脂的 12ml 带螺旋盖试管置 49 ℃水浴中以铺制诱导

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肝素蛋白多糖(HSPG)。前三种蛋白的摩尔含量一般差不多相等，HSPG的含量则偏低，但是鉴于ECM Gel是生物提取物，我们不能确定各成分的准确浓度。 ECM Gel来源于细胞裂解物还是真正的细胞基质？ ECM Gel基质胶由整个EHS肿瘤（不是分离细胞）制备而成。它是肿瘤的全提取产物。 ECM基质胶与Matrigel®(Corning)、Geltrex®(Thermo)或Cultrex®(Trevigen)一样吗？ ECM Gel基质胶是这些产品的生物等效品，ECM基质胶（E6909，E1270）由默克