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- AXYGEN
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- MCT-150-V
- 2025年07月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
999
- 供应商：
麦格生物
- 现货状态：
现货
- 保修期：
/
- 规格：
500/包，10包/箱
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文献和实验冰上，用冰冷的 PBS 洗涤细胞。2. 吸出 PBS，然后加入冰冷的裂解缓冲液（每 107 细胞/100 mm 培养皿/150 cm2 培养瓶加入 1 ml；每 5×106 细胞/60 mm 培养皿/75 cm2 培养瓶加入 0.5 ml）。3. 用预冷的塑料细胞刮棒刮下贴壁细胞，然后轻轻地将细胞悬浮液转移至预冷的微量离心管中。4. 在 4 ℃ 下持续搅拌 30 分钟。5. 在 4 ℃ 预冷的离心机中以 16000 × g 的转速离心 20 分钟。6. 轻轻地从离心机中取出离心管，置于冰上。将上清
TE溶解。 3．预杂交 膜放入袋内 68℃预杂交 1小时，每 100cm2膜至少用 20ml预杂交溶液。 4．杂交 每100cm2膜用2.5 ml杂交液（杂交溶液用预杂交溶液中加新鲜变性的探针组成），68℃至少杂交6小时。 5．洗膜 室温下用50ml 2×SSC， 0.1％（W/V）SDS洗膜，5分钟× 2次，68℃用0.1×SSC， 0.1％（W/V）SDS洗膜，15分钟×2次，晾干。 6．检测 （1）膜在缓冲液中洗涤1分钟。 （2）缓冲液Ⅰ稀释抗体结合物至150 mU/ml
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
，使末端标记的互补单链寡核苷酸退火形成双链，保存于-20 ℃。 凝胶阻滞试验： 在结合缓冲液中加8 µl核蛋白，1µg poly (dI-dC)和100 fmol标记探针，反应总体积20 µl；在特异性竞争试验管中，则预先加入10 pmol冷探针（未标记的双链寡核苷酸），在非特异性竞争试管中预先加入10 pmol突变型双链寡核苷酸，混匀并室温放置30 min后再加入100 fmol标记探针。各反应管在室温中放置30min后，取反应液20µl上样，经5%非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳分离（150V，100
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