MCT-150-B AXYGEN 1.5ml蓝色离心管

总RNA和基因组DNA同步纯化试剂盒

。 4.加0.45ml 4℃预冷的Buffer R-B，盖紧离心管，用力上下混合均匀。5.加0.45ml 4℃预冷的Buffer R-C，盖紧离心管，用力上下混合均匀，冰浴5min 6.4℃，≥12000×g 离心5min。 离心后溶液分相：RNA和游离DNA位于下相；脂质、多糖和色素位于蓝色上相；蛋白质与基因组DNA复合物形成相间沉淀；若起始样品是动物组织，可能有肉眼可见的不溶性物质沉淀在管底。 7.吸取0.8ml下相溶液，转移至另一离心管中，按 [A.纯化RNA]进行操作。吸弃原离心管中

我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！

核蛋白提取： （1）5 millions个离心收集 （2）弃上清，细胞沉淀重悬于1.5ml冰预冷的PBS缓冲液，4℃下2000 rpm离心5min。 （3）弃上清，沉淀重悬于500μl冰预冷的Buffer A离心收集，再悬于0.5 ml Buffer A。 （4）冰上放置10分钟，加入NP40使终浓度为0.5%，混匀后，轻摇20秒。 （5）4℃下1330×g离心15分钟得到细胞核。 （6）重悬于50µl Buffer B，于冰上强烈振荡15分钟，4℃下16300×g离心10分钟

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器混匀一次。4°C ，3000 rpm 离心 5 分钟以沉淀细胞核。弃上清，并加入含有 DTT 的缓冲液 B 。这个时候你会发现细胞核不太容易重悬，最好用剪去前端部分的 1 ml 枪头吹打数次进行混匀。再次离心，弃上清，并将沉淀用 300 ul 含有 DTT 的缓冲液 B 再次重悬，并将实验组和对照组细胞核样品分别转移到一个新的 1.5 ml 离心管中。此时，我们已经为后续酶切提供了一个合适的缓冲液体系。虽然试剂盒推荐微球菌酶的一般起始量为 0.5 ul/每 4X 106 细胞，但因为我们仍然想优化