HT-10-C-HTR-5 AXYGEN HT10ul机

肿瘤成球实验以及肿瘤球体增殖/活力检测方案

液体。1536 孔球形微孔板建议采用自动液体进样。 * 在手动接种过程中，请确保移液管吸头不会刮伤孔的底部或侧面，以免损坏 Corning® 超低附着表面涂层。 **如果使用自动液体进样器，请增加稀释体积以考虑灌注仪器体积和管道的长度 (10 mL)。 将球形微孔板置于设置为 37 °C 和 5% CO2 的加湿培养箱中。   观察评估 0、24、48 和 72 小时时间点的球状体形成和生长，并进行细胞活力测定。如实验设计时间更长，每 3-4 天更换一半培养体积的新鲜 3dGRO™ 球状体培养

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，但如果需要，可以使用更浓缩的干细胞合格ECM凝胶。 3.将1.5 mL 1:80稀释的ECM凝胶基质（CC131）加入6孔板的每个孔中。 涡旋培养板，以使ECM凝胶基质均匀地铺展在板的表面上。 使用前，将其存放在2-8°C的冰箱中冷藏过夜或至少2小时。 如果不立即使用，用保鲜膜将ECM包被的培养板包好，并储存于2-8 °C下直至准备使用。应在3-4天内使用ECM包被的培养板。 4.在接种细胞之前，将板放回到室温下10-15分钟，除去包被溶液，然后每孔加入3 mL人ES/iPSC生长培养基（SCM130

一个好东东，与大家分享

细胞处理： ⑴ 将培养细胞悬浮后，用TBS洗涤一次。 ⑵ 离心4000g×5min，去除上清液。 ⑶ 加10倍体积的裂解缓冲液。 ⑷ 50-55°C水浴1-2hr。 （二）DNA提取 1. 加等体积饱和酚至上述样品处理液中，温和、充分混匀3min。 2. 离心5000g×10min，取上层水相到另一1.5ml离心管中。 3. 加等体积饱和酚，混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。 4. 加等体积酚/氯仿，轻轻混匀，离心5000g×10min，取上层水相到另一管中。如水相