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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
麦格生物
- 现货状态:
现货
- 保修期:
/
- 规格:
5盒/包,8包/箱
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文献和实验方法。 收获细胞(保证健康的单细胞悬液)。 使用胰蛋白酶-EDTA 溶液 ( T3924 ) 分离上述贴壁细胞。Millicell® Digital Cell Imager(MDCI10000)观察到细胞融合度应为80-90%,且状态良好。 以300 x g离心细胞悬液 5分钟并吸出上清液。将细胞重悬于少量培养物中,例如 3-5 mL 的 3dGRO™ 球状体培养基 ( S3077 ) 注:可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL 圆底聚苯乙烯试管,以实现单细胞悬浮。
水至25 ul。 混匀,置于SLAN荧光定量PCR仪中。95℃5min预变性后,95℃15 s→65℃35 s(荧光检测),40 cycles。荧光定量PCR一般把退火和扩增设成一个温度,只在扩增出现问题时才会考虑设梯度。 (侯哥论文中的:95 °C 10分钟→95 °C 15秒→60 °C 1分钟;40个循环。) 以双△Ct值法计算靶基因相对表达水平: GRP78相对表达水平=2-△(△CT
(包括1ml、200μl、20μl Tip头;EP管和PCR反应管等):用0.1%的DEPC水(1000 ml超纯水加入1ml DEPC)37℃浸泡过夜,高压灭菌。2. 提取RNA,用DEPC水溶解3. RT我是用PCR仪来控制温度和时间的,所以RT是在PCR反应管中作的。4. 操作过程中要戴一次性手套,并经常换手套。最好把要直接接触样品的东西都用DEPC水处理一下,枪头盒插好枪头后,加入1-2ml的0.1轕C水,在灭菌就行了;现在有进口的RNASE FREE的枪头买,直接用不用处理的如何消除污染
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