RWPE-1人前列腺正常细胞

 

 商品属性：

产品名称	规格	货号
RWPE-1人前列腺正常细胞	1×10^6cells	BJ-X937

 公司产品仅供科研研究使用不得用于临床诊断！
1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

3、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结

晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；



二、细胞培养操作
收货方式 ：T25瓶 ，冻存管
收货处理 ：观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态    收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏
传代密度 ：细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养    第二天换液并检查细胞密度
传代比例 ：首次传代建议1：2传代 ，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿    一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

传代方法

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。         b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞贴壁情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。         c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

三、培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。
9. 注意：1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
公司正在出售的产品：
"Phospho-NFKB p65(Ser468)： 0酸化细胞核因子NF-κB p65抗体 人结直肠癌细胞;T84
LIF Protein Mouse 重组小鼠 LIF 蛋白 (His 标签) 大鼠酶Ⅰ(CA1)ELISA试剂盒 IL-2sR Alpha/CD25(Human soluble interleukin-2 receptor)  人白介素2可溶性受体α链 96T
Phospho-eNOS (Thr495)： 0酸化合成酶3(内皮型)抗体 MAP2K1 Others Mouse 小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
小鼠胃粘膜上皮细胞完全培养基 100mL 大鼠酶2(CA-2)ELISA试剂盒 ADRA1A(Mouse adrenergic alpha-1A receptor)  小鼠能a1A受体 96T
NIPP1： 核抑制蛋酸酶1抗体 C127细胞，细胞 人胃癌细胞,9811C11细胞 SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-1"    "Intra Acrosomal Protein： 顶端体蛋白10抗体 SHPK Others Human 人 CARKL / SHPK 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
人直肠平滑肌细胞完全培养基 100mL 人白介素2(IL-2)ELISA 试剂盒 Nrf2 peptide 核因子2相关因子2抗原 0.5mg
human secretory IgA： 人分泌型免疫球蛋白A 0.1ml
Rhesus antibody Rh CD46/MCP 膜辅蛋白抗体 非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2 人癌细胞，HCC1428细胞 LTEP-a-2(肺腺癌细胞)
ACVR1B Others Cynomolgus 食蟹猴 ACVR1B / ALK-4 人细胞裂解液 (阳性对照) 人白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA 试剂盒 NRF-1(nuclear respiratory factor-1) 核呼吸因子-1抗原 0.5mg"    "RBBP6： 增殖潜能相关蛋白抗体 罗猴胎肾细胞;MA104
人胚胎皮肤成纤维细胞;HES 人胎盘滋养层细胞完全培养基 100mL 大鼠层粘连蛋白亚基γ-2(LAMC2)ELISA试剂盒 SP-R(Human substance P receptor)  人P物质受体 96T
Rho C： RhoC抗体 肠动脉内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105次方(1ml)
RN-h, 大鼠海马趾神经元 大鼠层粘连蛋白β1(LAMβ1)ELISA试剂盒 cGMP(Human Cyclic guanosine monophosphate)  人环0酸鸟苷 96T
RNF170： 环指蛋白170抗体 CD8A Others Rat 大鼠 CD8A / Lyt2 人细胞裂解液 (阳性对照)"    "CL-0407NCTC 1469(小鼠正常肝细胞)5×106cells/瓶×2 人组蛋白H2b(histon-H2b)ELISA 试剂盒 Goat Anti-human IgG/Cy5 Cy5标记的羊抗人IgG 0.1ml
RWPE-1人前列腺正常细胞GPCR MRGX2： G蛋白偶联受体MRGX2蛋白抗体 EPC, 大鼠血管内皮祖细胞 Rattus
HUVEC single donor Pellet 人脐静脉内皮细胞团块 > 1 mio.cells 球状少突细胞培养基OsM 人组胺(HIS)ELISA 试剂盒 Goat Anti-human IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的羊抗人IgG 细胞系的实验步骤：
一、实验前准备工作
1、提前24h取12mL DMEM(abs9483)和RPMI 1640(abs9484)完全培养基（含10%FBS(abs972)，下同）于50mL离心管内，置于4℃冰箱中预冷；
2、将分装好的Matrigel基质胶(abs9490)提前24h从-20℃放入4℃，使其融化成液体状态；
3、将无菌的1mL移液器枪头放入无菌50mL离心管内，置-20℃冰箱预冷。
二、琼脂糖包被96孔板
1、准确量取6mL RPMI 1640培养基（或DMEM培养基）于2个10mL的注射玻璃瓶内，加入90mg琼脂糖(abs44056213)，盖塞后放入80℃的水浴锅内加热溶解30min；
2、加热结束后，将注射瓶放入灭菌锅内，115℃灭菌30min；
3、灭菌完成后，迅速取出注射瓶放入超净台内。将注射瓶内的琼脂糖溶液倒入无菌的加样槽中，用多通道移液器以每孔60μL的量加入96孔板内。注意：由于琼脂糖溶液在室温时会凝固，因此从灭菌锅内取出琼脂糖溶液后
一定要快速转移至超净台内并迅速加入至96孔板中。此外，为保证加样时琼脂糖不冷却，需要同时灭菌加样槽和100μL的移液器枪头。
4、加入完成后，96孔板要保持水平约30min使孔内的琼脂糖凝固。