RD人横纹肌肉瘤细胞

商品属性：

产品名称	规格	货号
RD人横纹肌肉瘤细胞	1×10^6cells	BJ-X930

 

 
 公司产品仅供科研研究使用不得用于临床诊断！
1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

3、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结

晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；



二、细胞培养操作
收货方式 ：T25瓶 ，冻存管
收货处理 ：观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态    收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏
传代密度 ：细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养    第二天换液并检查细胞密度
传代比例 ：首次传代建议1：2传代 ，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿    一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

传代方法

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。         b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞贴壁情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。         c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

三、培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。
9. 注意：1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
公司正在出售的产品：
"Phospho-NMDAR2B (Tyr1336)： 0酸化谷酸受体2B抗体 P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]细胞，骨髓瘤细胞 人结肠癌细胞,SW620细胞 CM-H053人子宫平滑肌细胞完全培养基100mL
BST2 Others Mouse 小鼠 TETHERIN / BST2 / CD317 人细胞裂解液 (阳性对照) 大鼠视黄醇结合蛋白4(RBP4)ELISA试剂盒 NGF(Mouse Nerve growth factor)  小鼠神经生长因子 96T
Phospho-NMDAR2B (Tyr1252)： 0酸化谷酸受体2B抗体 平滑肌细胞培养基SMCM-sf
P9小鼠骨髓基质细胞 P9 mouse bone marrow somal cells 1640+10%FBS 大鼠视黄醇结合蛋白4(RBP-4)ELISA 试剂盒 EG-VEGF(Human Endocrine gland vascular endothelial growth factor)  人内分泌腺来源的血管内皮生长因子 96T
NOX2： NADPH氧化酶2抗体 RK1 Others Human 人 kA / RK1 人细胞裂解液 (阳性对照)"    "CD2 Others Rat 大鼠 CD2 人细胞裂解液 (阳性对照) 人α2纤溶酶抑制物(α2-PI)ELISA 试剂盒 SHP2 peptide 蛋白酪酸0酸酶2抗原 0.5mg
IQCA1： IQCA1蛋白抗体 EB病毒转化的绒猴淋巴细胞;B95-8
B16BL6细胞，小鼠黑色素瘤细胞 VERO C1008 (E6)(非洲绿猴肾细胞) EB病毒转化的人B淋巴细胞;KM932 人α2抗纤溶酶(α2-AP)ELISA 试剂盒 SIP1 peptide 运动神经元存活蛋白结合蛋白1抗原 0.5mg
INTS3： 集成复杂蛋白亚单位3抗体 SERPINF2 Others Human 人 SerpinF2 / SERPINF2 人细胞裂解液 (阳性对照)
人男性正常细胞;Hs68 人α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA 试剂盒 SIRT1(sirtuin 1) 沉默调节蛋白1抗原 0.5mg"    "Sars结构蛋白表达株;293 001B 人肾系膜细胞完全培养基 100mL 大鼠白细胞分化抗原44(CD44)ELISA 试剂盒 PCK(Human phosphoenolpyruvate carboxykinase)  人0酸烯醇式酸羧激酶 96T
RNF56： 环指蛋白56 0.2ml
Rhesus antibody Rh MCM7 染色体维持缺陷蛋白7抗体 HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞
MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞 大鼠白细胞分化抗原4(CD4)ELISA试剂盒 Human trypsin  人胰蛋白酶 96T
RAMP1： 受体活性修饰蛋白1抗体 CD22 Others Mouse 小鼠 Siglec-2 / CD22 人细胞裂解液 (阳性对照)"    "CL-0278HCCLM3(人高转移肝癌细胞)5×106cells/瓶×2 人诱导型合成酶(iNOS)ELISA 试剂盒 IgM/APC APC标记的小鼠抗兔IgM 0.1ml
GPR88： G蛋白偶联受体88抗体 MGC80-3(MGC-803)人胃癌细胞 Human
HPMEC Pellet 人肺微血管内皮细胞团块 > 1 mio.cells 多聚赖氨酸 1 mg/mlPLL 人游离脂肪酸(FFA)ELISA 试剂盒 IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的小鼠抗兔RD人横纹肌肉瘤细胞IgM 0.1ml
细胞系的实验步骤：
一、实验前准备工作
1、提前24h取12mL DMEM(abs9483)和RPMI 1640(abs9484)完全培养基（含10%FBS(abs972)，下同）于50mL离心管内，置于4℃冰箱中预冷；
2、将分装好的Matrigel基质胶(abs9490)提前24h从-20℃放入4℃，使其融化成液体状态；
3、将无菌的1mL移液器枪头放入无菌50mL离心管内，置-20℃冰箱预冷。
二、琼脂糖包被96孔板
1、准确量取6mL RPMI 1640培养基（或DMEM培养基）于2个10mL的注射玻璃瓶内，加入90mg琼脂糖(abs44056213)，盖塞后放入80℃的水浴锅内加热溶解30min；
2、加热结束后，将注射瓶放入灭菌锅内，115℃灭菌30min；
3、灭菌完成后，迅速取出注射瓶放入超净台内。将注射瓶内的琼脂糖溶液倒入无菌的加样槽中，用多通道移液器以每孔60μL的量加入96孔板内。注意：由于琼脂糖溶液在室温时会凝固，因此从灭菌锅内取出琼脂糖溶液后
一定要快速转移至超净台内并迅速加入至96孔板中。此外，为保证加样时琼脂糖不冷却，需要同时灭菌加样槽和100μL的移液器枪头。
4、加入完成后，96孔板要保持水平约30min使孔内的琼脂糖凝固。