NCI-H3122人非小细胞肺癌细胞

 


 

商品属性：

产品名称	规格	货号
NCI-H3122人非小细胞肺癌细胞	1×10^6cells	BJ-X888

公司产品仅供科研研究使用不得用于临床诊断！
1、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养

液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃，5%CO2细胞

培养箱中培养；

2、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终

止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（

FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

3、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结

晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；



二、细胞培养操作
收货方式 ：T25瓶 ，冻存管
收货处理 ：观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态    收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏
传代密度 ：细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养    第二天换液并检查细胞密度
传代比例 ：首次传代建议1：2传代 ，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿    一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

传代方法

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。         b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞贴壁情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。         c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

三、培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。
9. 注意：1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
公司正在出售的产品：
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人成纤维细胞完全培养基 100mL 人蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3)ELISA 试剂盒 HHV8/ORF K2(Human herpesvirus 8 type P) 人类疱疹病毒8抗原 0.5mg
Histone H3 (Di Methyl K36)： 二甲基化组蛋白H3抗体 水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S3 细胞，Hela细胞 HEL299(红白细胞白血病细胞)
CN3 Others Rat 大鼠 Coactin 3 / CN3 人细胞裂解液 (阳性对照) 人蛋白Z(Protein Z)ELISA 试剂盒 HIF-1 Beta/ARNT1(Hypoxia-inducible factor-1 Beta) 缺氧诱导因子1β 抗原 0.5mg
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Perilipin A+B： 脂滴包被蛋白A+B抗体 SIGLEC6 Others Human 人 SIGLEC6 / CD327 人细胞裂解液 (阳性对照)
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RK2 Others Mouse 小鼠 RK2 / kB 人细胞裂解液 (阳性对照) 大鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒 ACE  大鼠血管紧张素转化酶 96T